his标签的蛋白，用镍柱6M盐酸胍变性纯化后，产率和浓度都不高，请高手指教啊。
在蛋白质纯化过程中？ 蛋白质变性影响因素：1，一般温度高于60摄氏度持续一段时间会变性。不同蛋白耐受高温不同，具体问题具体分析。2，高浓度有机溶剂，如丙酮，乙醚，巯基乙醇等。3，含有蛋白酶环境会分解蛋白。4，变性剂，如高浓度盐酸胍和尿素。5，盐溶液，在一定浓度盐作用下，会使蛋白中折叠在内部的疏水集团暴露而改变折叠结构。6，pH值变化，强酸强碱条件下会破坏蛋白质结构。等电点时蛋白质沉淀。因此，克服和避开上述内容可以减少变性。具体措施：1，控制温度，pH值。避开强酸强碱和等电点。2，尽量减少和有机溶剂和变性剂的接触。3，添加蛋白酶抑制剂，可以减少蛋白分解。4，盐浓度适宜，不能太高。5，增加NMSF，N-马来酰亚胺，去氧胆酸钠等抗氧化物质，可以防止蛋白被氧化变性。
蛋白质纯化技术的方法 一、电泳：在克隆基因表达产物的检测分析过程中，电泳是常用的方法，但在纯化蛋白时，通常都不采用电泳的方法。由于某些特殊的目的，需要用聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化蛋白质，常用下述方法进行：①从电泳后的凝胶上切下所需的相应条带，将凝胶压碎，用缓冲液浸泡，使其中的蛋白质扩散出来，从而获得纯化的蛋白质。此法简单但回收率低。②将电泳后的凝胶用电洗脱的方法使蛋白质从凝胶转移到溶液中，从而达到纯化的目的。此法快速，回收率高，但需要特殊的电泳装置。二、色谱法：色谱法（chromatography）是蛋白纯化中最常用的一种方法，这种方法既可以制备大量的纯化蛋白质，又可以保持蛋白质的生物学活性。色谱的种类很多，可分为常规色谱和高效液相色谱（high-performance liquid chromatography，HPLC）。凝胶过滤色谱、离子交换色谱、亲和色谱等均为常规色谱法。HPLC包括反相高效液相色谱（reversed-phase HPLC，RP-HPLC）、离子交换高效液相色谱（ion exchange HPLC）等。根据目标蛋白性质的不同可选用相应的色谱分离技术纯化蛋白质。1.凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法（gel-filtration chromatography，GFC）又称排阻色谱。凝胶是一类具有三维空间结构的多孔网状颗粒。
求助关于Ni柱纯化蛋白问题。 Ni柱的结合条件中最主要的因素就是pH值。包含体裂解液成分：50mMTris－HclPh8.0，100mMNaCl，6M盐酸胍，0.5mMDTT就可以了。尿素变性不如盐酸胍彻底，所以标签不暴露，不少人。
尿素在蛋白质纯化中的作用
His标签蛋白纯化步骤，在重组表达的目的蛋白上加入标签，可以更方便、高效的实现目的蛋白的纯化。下面就以Akie的Hi标签纯化填料和预装柱为例，详细说明操作步骤。
如何利用透析法进行脱盐浓缩蛋白？ 二、蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化方法很多，主要有：（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出.盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好.由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀.影响盐析的因素有：（1）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4度）操作外，一般可在室温中进行.一般温度低蛋白质溶介度降低.但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25度）比0度时溶解度低，更容易盐析.（2）pH值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶介度最低.（3）蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）.因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在2.5-3.0%。.
蛋白纯化时变性剂能用异硫氰酸胍代替盐酸胍吗 纯化时变性？一般可以用尿素或者SDS啊。留样时变性用SDS和巯基乙醇。盐酸胍偶尔也见过用的 但是你说的异硫氰酸胍 倒是没见过
