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胶体电泳的现象和原理 电泳配胶设备

2020-10-03知识10

电泳中电解质液的选择是根据什么条件 1.辅助液和溶胶的电导率要尽量一致;2.辅助液与溶胶的颜色要有较大区别,以便形成清晰界面;3.辅助液与溶胶不发生反应。

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266KDa的蛋白具体怎么电泳?浓缩胶和分离胶分别用多大浓度的?用湿法转膜用多大的电压或电流?

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用醋酸纤维薄膜做电泳支持物有什么优点? ①电泳后区带界限清晰;②通电时间较短(二十分钟至一小时);③它 对各种蛋白质(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都几乎完全不吸附,因此无 拖尾现象;④对染料也没有吸附,因此不结合的染料能完全洗掉,无样品处几乎完全 无色.它的电渗作用虽高但很均一,不影响样品的分离效果,由于醋酸纤维素薄膜吸 水量较低,因此必需在密闭的容器中进行电泳,并使用较低有电流避免蒸发.尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电 泳低,但它具有简单,快速等优点.

聚丙烯酰胺凝胶作为电泳支持物,有何优缺点? 聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分离蛋白质和寡核苷酸.作用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应.它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开.根据浙大哲博检测的分离经验,可以发现下列问题最为容易出现:1.pH对整个反应体系的影响是至关重要的.SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统.在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动.由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压梯度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带.当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离.2.根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS。

琼脂糖凝胶电泳具体操作步骤是什么?需要注意什么事项? 一。操作步骤:21131、电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂5261糖凝胶4102电泳1653就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。2、凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳,浓度通常在0.5~2%之间,低浓度的用来进行大片段核酸的电泳,高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎,小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。3、缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE,而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。4、电压和温度电泳时电场强度不应该超过20V/cm,电泳温度应该低于30℃,对于巨大的DNA电泳,温度应该低于15℃。5、DNA样品的纯度和状态注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐,用酚可以去除蛋白。6、DNA的上样正确的DNA上样量是条带清晰的保证。注意太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊,而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。7、Marker的选择DNA电泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正对照DNA来估计DNA片段大小。Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的,这样对。

什么是电泳技术 最低0.27元开通文库会员,查看完整内容>;原发布者:冻结你的眼泪电泳的2113基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁5261移的过4102程。电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁1653移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pHpH值下可以带酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937等在年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响。

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