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二氨基联苯胺 染色法 western blotting的原理、操作步骤及意义

2020-10-02知识7

衣物的染料是不是有可能致癌?如何避免买到这类产品? 现在一般合格的衣服染色剂是什么?是否安全?存不存在致癌风险?看过很多的服装网店,完全没有一家(无论…

石蜡切片免疫组化实验—快速酶免疫组化二步法,实验原理根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后,。

western blotting的原理、操作步骤及意义 一。免疫印迹法免疫印迹法(immunoblotting test,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southen blot相类似,亦被称为Western blot。免疫印迹(western blotting)是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离;②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上,用非特异性,非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域;③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端,极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度,使其成为使用最广泛的免疫化学方法之一。第一阶段为SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷,在聚丙烯酰膪凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量越小,泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带)。第二阶段为电转移。将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上,选用低电压(100V)和大电流(1~2A),通电45min。

dab染色是用来做什么的 DAB染色法也叫二氨基联苯胺法,用于检测细胞中过氧化物酶的活性部位。原理:细胞颗粒中的过氧化物酶,能将过氧化氢中的氧释放出来,氧化二氨基联苯胺(DAB),形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。

联苯胺—过氧化氢测柱头可授性的实验中1%联苯胺怎么配? 1%联苯胺的配制方法:把1千克水加热到60度或更高,然后把标准大气压下的联苯胺低温液化,取出0.1kg,加入热水中,密闭后充分摇匀,使得联苯胺充分溶解,就制成了1%联苯胺。。

免疫印迹法的阶段

什么是印迹法?专业一点 免疫印迹法(Western blotting)是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点,是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法,如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。免疫印迹法(immunobiotting test,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linkedimmunoelectrotransfer blot,EITB),因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法 Southernblot 相类似,亦被称为Western-blot.免疫印迹法分三个阶段进行.第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷,在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量越小,泳动速度就越快.此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带).第二阶段为电转移:将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上,选用低电压(100V)和大电流(1~2A),通电45min转移即可完成.此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见.第三阶段为酶免疫定位:将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后,加入能形成不溶性显色物的酶反应底物,使区带染色.常用的。

二氨基联苯胺的使用说明 使用前先用蒸馏水将B显色液(1:25)稀释为工作液,然后按比例(1:25)加入A显色液,混匀后立即使用。显色时间1-30分钟,显色时间过长可引起本底增高,故应密切观察显色过程(一般3-10分钟最理想),并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。稀释方法:取去离子水920ul,加入B显色液40ul混匀,再加入40ul的A显色液,混匀后即可使用。工作液建议用量:免疫组化50-100ul/切片,WB每张膜200-5000ul/膜

#蛋白质#石蜡切片#免疫组化

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