转基因时，一定要用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒吗？ 1 不一2113定要用相同的限制酶5261，用同尾酶可以起到相同的效果4102。所谓同尾酶，就是识别序列不同1653，但切出的粘性末端是相同的两个酶。例如SpeI和XbaI就是同尾酶(SpeI 是A|CTAGT，XbaI是T|CTAGA)形成的粘性末端就可以连接。2 人为合成一段单链序列添加到DNA末端十分麻烦。希望采纳
转基因时，一定要用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒吗？高二的生物书说基因拼接时，一定要用相同的限制酶，不然粘性末端对不上，不能组合到质粒里去，但是不能人为地在目的基因
20ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别：DNA的量是3.5微升1、产物浓度不同20ul双酶切体系比10ul双酶切体系产物的浓度高。2、DNA反应量不同20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多，进行双酶切时所要切的DNA量也不同。研究中常用的双酶切体系就是20ul双酶切体系和10ul双酶切体系，二者除了调配比例之外，所用的酶是相同的，所以反应温度，酶切时间等等都差不多。只有在需要回收用于连接的时候才选取50ul体系的双酶切体系，同时多增加DNA含量。扩展资料：双酶切时注意事项：1、做转化的时候，进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解.为保险起见，一般连接3小时，16度。2、对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高，会使克隆株无法筛选出来。3、对照的设立：为验证双酶切是否成功，可做如下对照：酶切反应时加各单酶分别切，两管，用同一种BUFFER，跑胶，看单切的两管是否成线性；如两管均成线性可初步判断双酶切成功。做转化时，也要进行对照。参考资料来源：-双酶切参考资料来源：-PCR
