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聚丙烯酰胺凝胶电泳为什么出现锯齿状胶体? 聚丙酰胺凝胶电泳分离胶的大小

2020-09-30知识7

聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩胶的浓度为什么小?而分离胶的浓度大? 浓缩胶浓度小,孔径大,这样子样品先进入浓缩胶时,能将弥散在加样孔中的蛋白聚合在一起,压的很紧,一起…

聚丙烯酰胺凝胶电泳为什么出现锯齿状胶体? 聚丙酰胺凝胶电泳分离胶的大小

聚丙烯酰胺凝胶电泳为什么出现锯齿状胶体? 如果是分离胶有锯齿,应该是制胶的问题,与电泳槽和电泳缓冲液无关.可能水封做得不好,加水太猛,冲出了锯齿;同时胶凝固太快,可能是AP和TEMED过多.可减少二者用量,使胶在15-30分钟凝固.加水封要轻,避免扰动表面.至少加完水后界面恢复平整.

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解释聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳法的三个效应 我也在找这道题的答案.以下是我搜到的,还没整理,你简化一下应该能用哈在不连续PAGE电泳中的三大物理效应:1、样品浓缩效应1)凝胶孔径不连续性:在3层凝胶中样品胶及浓缩胶为大孔径胶,在2层凝胶中样品/浓缩胶为大孔径胶,分离胶为小孔径胶;在电场作用下,被分离物在大孔径中移动遇到阻力小,移动速度快,当进入小孔径胶时,被分离物移动受到阻力大,移动速度变慢,因而在两种胶的交界处,由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带.2)缓冲体系离子成分及pH值的不连续性:在浓缩胶中,由于被分离物的pI介与前导离子与尾随离子的pK之间,共同向正极移动,并被浓缩成极窄的区带里.3)电位梯度的不连续性:在不连续系统中,电位梯度的差异是自动形成的.电泳开始后,由于前导离子的迁移率最大,就会很快超过被分离物,因此在快离子后面,形成一个离子浓度低的区域,这时就有了较高的电位梯度.这种高电位梯度使后面被分离物和尾随离子在前导离子后面加快移动.当前导离子、被分离物和尾随离子的移动速度相同时,建立一种稳定状态,这时在前导离子和尾随离子之间形成一个稳定而又不断向正极移动的界面,这就是样品被浓缩的中间层.2、电荷效应在浓缩胶中,被分离物的各组分被浓缩,。

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聚丙烯酰胺凝胶作为电泳支持物,有何优缺点? 聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分离蛋白质和寡核苷酸.作用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应.它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开.根据浙大哲博检测的分离经验,可以发现下列问题最为容易出现:1.pH对整个反应体系的影响是至关重要的.SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统.在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动.由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压梯度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带.当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离.2.根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS。

聚丙烯酰胺凝胶电泳,但是样品只停留在浓缩胶和分离胶之间???我延长了时间但是没用。分离胶4%浓缩胶7% 这种情况一般是分离胶太浓了,或者说蛋白比胶孔大,进不去。你是说分离胶7%,浓缩胶4%吧?已经挺稀了,可能是蛋白沉淀了,凝聚成大块,所以进不去。这一般是样品太浓,变性时易沉淀。可以先稀释样品。也可能是配胶时有错误,比如缓冲液pH不对,储液挥发浓缩等等。如果Marker也进不去,就是胶的问题;如果marker正常,就是样品问题。

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳是根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白,蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小,电荷因素可以忽视。

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