变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和非变性的有什么区别？ 非变性凝胶里面没加变性剂，一般是SDS。非变性胶跑出来的蛋白能保持其活性一般用做功能试验，如EMSA。由于没有变性剂的原因非变性胶电泳时除了与蛋白分子量有关也会受都。
sds-page和Native-PAGE的差别
蛋白质变性分子量会变小吗？ 蛋白质变性分子量会变小蛋白质变性（denaturation）：生物大分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象.我以SDS-PAGE电泳为例试着说明你的问题：SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小.非变性凝胶里面没加变性剂.非变性胶跑出来的蛋白能保持其活性一般用做功能试验，如EMSA.由于没有变性剂的原因非变性胶电泳时除了与蛋白分子量有关也会受都电荷的影响，因此对蛋白等电点的确定和缓冲液的酸碱性有注意，有时需要倒转电泳时的正负极.从跑的胶来看，变性胶会比较好看，带比较窄，非变性胶跑出来则比较粗糙.
SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方
nativegel跑电泳后条带什么样子的 非变性凝胶里面没加变性剂，一般是SDS.非变性胶跑出来的蛋白能保持其活性一般用做功能试验，如EMSA.由于没有变性剂的原因非变性胶电泳时除了与蛋白分子量有关也会受都电荷的影响，因此对蛋白等电点的确定和缓冲液的酸碱性有注意，有时需要倒转电泳时的正负极.从跑的胶来看，变性胶会比较好看，带比较窄，非变性胶跑出来则比较粗糙.
试述PCR扩增的原理和步骤 PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件。
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验步骤
PCR-SSCP原理和操作步骤，PCR-SSCP是1989年日本Orita等创建的筛查突变的新技术。它是一种简单、快速、经济的点突变筛查手段。PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经。
聚丙烯酰胺凝胶作为电泳支持物，有何优缺点？ 聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分离蛋白质和寡核苷酸.作用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应.它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开.根据浙大哲博检测的分离经验，可以发现下列问题最为容易出现：1.pH对整个反应体系的影响是至关重要的.SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统.在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动.由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压梯度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带.当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离.2.根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS。
