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荧光定量技术分析微生物丰度 请问:做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么?

2020-09-24知识18

实时荧光定量PCR即 Real time PCR(也称实时定量PCR)定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术,即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国。

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BONCAT荧光标记技术对微生物研究有怎样的帮助? 近日,研究人员宣布了通过微生物来实现化石燃料的绿色替代、让作物更加抗旱、甚至对环境清理产生重大影响的新方法。这项被称作 BONCAT 的技术,将使科学家能够更好地研究我们脚下的生命奥秘,也就是土壤本身。据悉,微生物是自然界中一个相当丰富的存在,即使是最微小的土壤样品,也可以轻松找到数十亿个微生物。【视频截图,来自:Berkeley Lab,via SlashGear】然而也正因如此,对大量微生物展开检查,有着相当大的难度。在理想世界中,科学家们能够在实验室中培养特定的样本,从而确定每种样本对生态系统的作用。但实际上,条件是很难控制的。相反,研究人员必须对其展开实地研究,有些地方(比如底下数百英尺)甚至很难涉足。好消息是,劳伦斯伯克利国家实验室的研究人员们,于近日宣布了一项崭新的研究进展。通过结合生物正交非标准氨基酸标记(BONCAT)和荧光激活细胞分选(FACS)技术,其能够识别海洋沉积物样本中活跃的海洋微生物个体。而现在,这项技术也能够同样适用于陆地土壤中的微生物族群。据悉,BONCAT+FACS 可在单细胞生物体中标记不同的起作用分子,只有那些活跃地产生新蛋白质的微生物会被荧光标签给附着。暂停 进入全屏 退出全屏 00:00 00:00 重播 。

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请问:做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么? Ct这是相对荧光定量的一个计算公式的简化形式,用于比较不同样品之间的差别或变化比率。Ct=-k lgX0+b(线性方程)用这个方程可以通过Ct值算出样品的起始浓度斜率=-1/lg(1+e。

什么是实时荧光定量PCR?有什么作用?请详细说明。 实时荧光定量PCR即Real time PCR(也称实时定量PCR)定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术,即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR(real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量,不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法,已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。实时荧光定量PCR 技术的主要应用:1.DNA 或RNA 的绝对定量分析:包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测,RNAi 基因失活率的检测等2.基因表达差异分析:例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等),特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证3.基因分型:例如SNP 检测,甲基化检测等Realtime PCR 常用的两种方法分别为:Sybr green(荧光染料掺入法)和Taqman probe(探针。

做荧光定量PCR时,它的计算公式是什么? Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。n为扩增反应的循环次数,X0为初始模板量,Ex为扩增效率,N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。扩展资料传统定量PCR方法简介:1)内参照法:在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。2)竞争法:选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。参考资料来源:-荧光定量PCR

从微生物学中学到了什么,对你今后的生活工作有什么帮助?为什么 微生物包括:细菌、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体以及病毒,它个体微小,与人类关系密切。涵盖了有益跟有害的众多种类,广泛涉及食品、医药。

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