慢病毒转染细胞，如何测moi值 细胞系预实验-MOI 的确定预实验的目的是了解所操作细胞被慢病毒32313133353236313431303231363533e58685e5aeb931333335306330载体感染的容易程度，另一方面在一些情况下虽然慢病毒已经感染进入细胞，但由于表达标记基因的启动子在该细胞内的表达效率不高，没能观察到感染现象。我们在预实验方案中加入不同启动子的病毒进行感染，并且用定量PCR测定感染后细胞内整合病毒，这样即使病毒没有表达也可以观察感染。1.感染前一天接种，使得第二天细胞汇合度为30-40%。培养板可以是96孔板（只通过显微镜观察荧光）或是24孔板（通过流式或是定量PCR确定感染比例）。2.设置不同MOI值的感染组，通常设立1，2，5，10，20，50，100的感染组别，各做两个孔，一个孔中加入终浓度为5 μg/ml的polybrene，另一组不加。Polybrene可以促进病毒对细胞的侵染，但在少数情况下它对细胞有伤害。常用的对照病毒包括CMV-GFP，EF1a-GFP，UbiC-GFP，PGK-GFP。一般细胞里面CMV启动子的表达活性是最强的，但在血液来源的一些癌细胞中EF1a的表现要优于CMV。UbiC在一般细胞中都表达，但表达活性一般要低一些，它在神经元等原代细胞的感染中是最好的。3.12-24小时后，将培养上清丢掉同时除去没有。
Marc145细胞的中文名称是什么？ marc-145一、细胞及培养1．Marc145细胞上皮样细胞，来源于猴肾细胞，从母细胞（MA 104细胞）克隆而得到，可连续培养.2．生长培养基DMEM（高糖型，含4500mg/L D－葡萄糖、L-谷氨酰胺，和110mg/L丙酮酸钠，不含碳酸氢钠）＋5％～10％新生牛血清+1％双抗（青霉素和链霉素）的培养液.3．冻存液生长培养基＋10％DMSO4．细胞健康生长的几项注意事项1）细胞没有支原体等外源因子的感染.2）培养液的pH值可在7.0－7.3，以7.2为佳.3）一般按1：3传代，细胞接种密度为1－1.5×105cells/ml，48hr后长成单层.4）培养基和血清的质量可靠、稳定；建议采用特级小牛血清.5）细胞及时传代，不可以在老化后传代，一般在刚长成细胞单层时进行传代、扩增.6）细胞传代时消化液用0.25％胰蛋白酶+0.03％EDTA，消化过程应尽量缩短在1～2分钟内完成.二、病毒感染、维持和收获转瓶中细胞长成单层后，弃瓶内细胞生长液，接种PRRS病毒.37℃吸附1hr，加入维持液，置37℃恒温室转瓶机上旋转培养3－5天.维持液：DMEM+4～5％新生牛血清.pH应为7.7.8；后期维持pH会慢慢降下来.细胞病变时间出现在接毒后48小时，72～96小时细胞病变达80％左右，当细胞出现80%以上病变（CPE）时，即可开始收毒；反复传过几代后病变。
