一般PCR一次多长时间?一个多小时?程序是什么样的? 一般先94度预变性两分钟,接着94度变性半分钟,60度退火半分钟,72度延伸半分钟,设置30个循环,最后72度条件下再延伸两分钟,我做PCR的时候是这么设置的,请little_deer29同学参考!
做了30个循环PCR后,发现产物量不足,取一部分产物再做30个循环,请问这是不是相当于做了60个循环? 从总PCR产物量来看,肯定没有60个循环那么多,因为你中间去掉了一部分产物.从PCP可能造成的突变数来说,确实相当于60个循环.所以是否相当于60个循环,取决于你从哪个角度看问题.
PCR循环次数是否越多越好?为什么 PCR循环次数通常就是30左右.循环数太多了,虽然可以一定程度的提高产物量,但是由于反应时间过长,有一些非特异产物的扩增也会相应增加,而且随着酶的扩增能力下降,合成目标片段的能力也会随之下降,也可能引起其他的非特.