在蛋白纯化的过程中，防止蛋白降解的方法 蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。常用抑制剂PMSF1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)；2)10mg/ml溶于异丙醇中；3)在室温下可保存一年；4)工作浓度：17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L)；5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。EDTA1)抑制金属蛋白水解酶；2)0.5mol/L水溶液，pH8~9；3)溶液在4℃稳定六个月以上；4)工作浓度：0.5~1.5mmol/L.(0.2~0.5mg/ml)；5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶；2)1mg/ml溶于甲醇中；3}储存液在4℃一周内稳定，-。
为什么说在酶诱导中的调节蛋白起负调节作用，而在降解物阻遏中的调节蛋白起正调节作用 阻遏物（repressor）：与一个基因的调控序列或操纵基因结合以阻止该基因恩录的一类蛋白质。阻遏物repressor 基于某种调节基因所制成的一种控制蛋白质，具有抑制特定基因（群）产生特征蛋白质的作用。由于它能识别特定的操纵基因，并与之结合，因而可抑制与这个操纵基因相联系的基7a64e59b9ee7ad9431333239303932因群，也就是操纵子的mRNA合成。在诱导酶中，调节基因的产物具有“活性”，但与诱导物质一经结合即失去活性，因而也就失去了与操纵基因的结合能力。相反在抑制酶中，调节基因的产物即所谓阻遏蛋白，它没有活性，但若与辅阻遏物结合便可成为具有活性的阻遏物，因此可与操纵基因结合。不论在哪种场合，阻遏物对特征蛋白质产生的调节机制是根据对mRNA合成是否阻碍，它是一种负调节。可是象大肠杆菌阿拉伯糖分解酶系的操纵子调节基因araC所生成的蛋白质，虽可作为阻遏物进行负调节，但是一当与阿拉伯糖结合，就会使操纵子的转录积极地进行，而成为正调节物质。1966年吉尔伯特等（W．Gilbert）部分精制了大肠杆菌的乳糖操纵子的阻遏物，决定了它的氨基酸序列。它是一个分子量约为38590的由4个亚基组成的酸性蛋白质，具有一个诱导物质的结合位点和一个操纵基因的。
细胞内蛋白质降解的主要途径有哪些 真核细胞内蛋白质的降解途径主要有三种，溶酶体途径、泛素化途径和胱天蛋白酶(caspase)途径。32313133353236313431303231363533e59b9ee7ad94313333633634641、溶酶体途径：蛋白质在同酶体的酸性环境中被相应的酶降解，然后通过溶酶体膜的载体蛋白运送至细胞液，补充胞液代谢库。胞内蛋白：胞液中有些蛋白质的N端含有KFERQ信号，可以被HSC70识别结合，HSC70帮助这些蛋白质进入溶酶体，被蛋白水解酶降解。胞外蛋白：通过胞吞作用或胞饮作用进入细胞，在溶酶体中降解。2、泛素-蛋白水解酶途径：一种特异性降解蛋白的重要途径，参与机体多种代谢活动，主要降解细胞周期蛋白Cyclin、纺锤体相关蛋白、细胞表面受体如表皮生长因子受体、转录因子如NF-KB、肿瘤抑制因子如P53、癌基因产物等；应激条件下胞内变性蛋白及异常蛋白也是通过该途径降解。该通路依赖ATP，有两步构成，即靶蛋白的多聚泛素化？多聚泛素化的蛋白质被26S蛋白水解酶复合体水解。(1)、物质基础：泛素(ubiquitin)：一种76个氨基酸组成的蛋白质，广泛存在于真核生物中，又称遍在蛋白。在一系列酶的作用下被转移到靶蛋白上，介导靶蛋白的降解。蛋白水解酶(proteasome)：识别、降解泛素化的蛋白质的复合物，由。
