超氧化物歧化酶活性的测定 去文库，查看完整内容>；内容来自用户：压岁钱揽逝植物组织中超氧化物歧化酶和平测定方法【实验目的】1.了解还原法测定抗氧化酶活性测定的原理方法。2.熟悉植物叶片中ROS去除机制。【实验原理】超氧化物歧化酶（SOD）普遍存在于动植物与微生物体内。SOD是含金属辅基的酶。高等植物有两种类型的SOD：Mn-SOD和Cu/ZnSOD。SOD能够清除超氧阴离子自由基（O2—），它与CAT、POD等酶协同作用来防御活性氧或其他过氧化物自由基对细胞膜系统的伤害，从而减少自由基对机体的毒害。超氧阴离子自由基（O2—）是生物细胞某些生理生化反应常见的中间产物。SOD能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧阴离子自由基，生成H2O2和O2。生成的H2O2可被过氧化氢酶分解为O2和H2O：SOD2O2—+2H+CATH2O2+O22H2O2O2+H2O超氧自由基非常不稳定，寿命极短，一般用间接方法测定SOD活性。本实验依据SOD抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性的大小。有氧化物质存在时，核黄素可在光照条件下还原。被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2—。当加入NBT后，在光照条件下O2—又可将NBT还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大光吸收。当加入SOD时，SOD可通过清除O2—，而抑制NBT的光。
如何检测线粒体内的ROS 活性氧检测试剂盒是利用荧光探e68a8462616964757a686964616f31333337616632针DCFH-DA进行活性氧检测的。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。活性氧检测试剂盒。荧光法检测线粒体产生和释放的反应性氧化物（ROS）[10]。羟基自由基的检测（二羟苄胺DHBAs和水杨酸盐Salicylate）[11]ROS was evaluated by the staining of 2’，7’-dichlorofluorescein diacetate（二氯荧光乙酰乙酸盐）.ROS production was detected by nitroblue tetrazolium（NBT，硝基四氮唑蓝）assay。目前，对于细胞线粒体产生的ROS 测定，所发展的方法有（荧光标记后）激光扫描共聚焦显微术（Takahashi et al.，2002）和荧光探剂DCFDA标记后的荧光分光光度法（Esposti，2002）等，本实验以lucigenin 或luminol 为探剂，用化学发光技术，对从正常大鼠肝细胞及心肌细胞分离的线粒体的METC 电子漏进行了测定
氧化应激指标的常用检测方法？ 氧化应激的定量评价方法大致分做三类：1）测定由活性氧修饰的化合物；2）测定活性氧消除系统酶和62616964757a686964616fe78988e69d8331333431363561抗氧化物质的量；3）测定含有转录因子的氧化应激指示物。进一步尚有：1）生物体内氧化应激的程度足以产生应答；2）活体内难以蓄积；3）在活体内不是被代谢，而是稳定存在，等等。理解这些要点对于临床普及推广都很有用。但在临床上，氧化应激的定量仍旧存在问题。因氧化应激与各种各样疾病均密切相关，故缺乏特异性，其量化指标难以用于特别指定的疾病。所以目前认为，当用于“全身评价”，或者在已经明确疾病原因为氧化应激后的“严重程度及予后”的评价。扩展资料抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同的健康问题。如果能够消除过多的氧化自由基，对于许多自由基引起的及老化相关疾病都能够预防。例如常见的糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆等疾病都被认为与自由基相关。抗氧化剂能在自然饮食中找到，是被称为三大抗氧化物质的维生素E、维生素C、和β-胡萝卜素。他们可以利用自身结构的特性来稳定自由基多余的电子，防止对细胞造成老化。豆类富含。
