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纯化蛋白的咪唑溶液用什么调节ph 镍柱纯化问题,我用的是Tris缓冲体系,含30mM的咪唑,然后洗杂洗脱,但是目的蛋白浓度很小,请打击帮帮忙

2021-04-27知识158

蛋白质有哪些理化性质? 蛋白质是由氨基酸组成的大分子化合物,其理化性质一部分与氨基酸相似,如两性电离、等电点、呈色反应、成盐反应等,也有一部分又不同于氨基酸,如高分子量、胶体性、变性等。

咪唑的性质和溶液配制 最低0.27元开通文库会员,查看完整内容>;原发布者:Vampire丶羽墨Array名称:Imidazole;1,3-diazacyclopenta-2,4-dieneCAS号:288-32-4CompoundID:795分子式:CArrayHArrayNArray 分子量:Array[g/mol]H-BondDonor:1 H-BondAcceptor:2pKa:7.1熔点:90-91℃密度:1.23g/cm Array外观:白色固体,或淡黄色固体Array:(括弧内是结合常数对数,该值越大结合力越强)Ca Array(0.1);Mn Array(1.6);Fe Array(3.3);Co Array(2.4);Ni Array(2.9);Cu Array(4.2);Zn Array(2.0)Array:咪唑的水溶性很好,可达500mg/ml,溶液澄清。可以用咪唑来配制缓冲液,其缓冲范围是pH6.2-7.8(25℃)。Array:咪唑溶液很稳定,可以高温灭菌处理。2-8℃可保存两年。注意,应当避光保存。Array:咪唑本身在紫外波段下有光吸收!Array问:过完Ni亲和层析柱子之后,洗脱液(elute)中250mM(或500mM甚至1M)的咪唑是否应该出去?答e799bee5baa6e58685e5aeb931333433623766:一般情况下,单纯过一个Ni柱是不够的,即便是样品足够纯,最好还是走一个凝胶过滤层析(分子筛)。走分子筛的过程当中可以很方便将咪唑除去。如果咪唑对于你样品蛋白的稳定性和均一性很重要,则可以考虑保留一定浓度的咪唑,。

蛋白质凝胶和沉淀的区别 precipitation沉淀一般是在纯化的初期使用的。比如你的组织样本打碎后,加了些缓冲剂,又离心过了。这时候在液态部分加点高浓度的盐,比如ammonium sulfate,就可以把某些蛋白提纯出来。原因是因为蛋白本来溶于水是因为蛋白表面有电荷的部分跟水形成了ionic bonds和hydrogen bonds.加了盐以后,盐跟水形成了ionic bond,蛋白失去了和水之间的bonds。蛋白和蛋白之间开始凝聚在一起,所以会沉淀。这个一般都是用在早期粗提取,而且提取出来的都是好多种蛋白混在一起。CaCl2也是一种盐,它的作用就是为了沉淀蛋白,所以作用是和ammonium sulfate一样的。Gel一般蛋白纯化使用的最多的GEL是SDS PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis).SDS一般是用在提纯基本完成以后分析蛋白的纯度,看看里面有几种蛋白,有些什么蛋白质的杂质。SDS带有负电,会吸附在蛋白上,破坏蛋白的三维空间结构。因为蛋白在SDS gel里面的一栋速度v=qE/f,不同蛋白在gel里面一栋的速度也不一样。同时SDS也可以用来粗略估计蛋白样本的分子量。好比你有一个未知蛋白在gel移动了3.5cm,5个蛋白标准样本,式量分别100kDa,200,300,400,500,在gel里面分别移动了1,2,3,4,5 cm,染色。

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