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1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次,理论上至少需要几个引物? indel引物大概要跑多少个循环,

2021-04-27知识2

PCR技术获取目的基因时为什么要至少经过3次循环才能从DNA分子中分离出目的基因 一般需要获得的基因是有一定长度的,而模板长度很长.设计的引物决定了扩增产物的长度.第一个循环,引物与模板互补,此时变成两个模板,但因为模板很长,没有什么终止扩增,所以第一个循环扩增出来的新片段很长很长.第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因.第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,所以当第三个循环完成时,这个片段是需要的长度,且是双链DNA,这就得到了需要的目的基因了.所以至少要3个循环才能分离出目的基因.

pcr技术扩增时,每一轮循环使用的引物一样吗 PCR技术中扩增的是两引物之间的核苷酸序列,意思是采用该技术,可以大量扩增引物之间的序列,一般情况下,我们需要大量的某一基因的片段时,我们在基因的两端分别设计引物(一段一条),然后在体外,采用PCR的方法,用引物进行体外DNA复制

大家的PCR一般都跑多少个循环啊 我觉得国外杂志上说要跑50个循环是有可能的。但我们一般也就25-35个循环,我们实验室有人跑过40个循环的,但是那种是所谓touch down 的方法。具体要跑多少个循环,我认为有以下几个因素可以决定:最关键的是引物设计的优劣,这几乎直接决定了实验的结果;其次是要扩增的PCR产物的长度和GC含量了,长度越长,当然圈数要相应增加了,GC含量高些,相应就难扩一点;还有就是TAQ酶量和引物浓度了,浓度大些,相应的圈数可能就要少些,但我试过,浓度过大会抑制反应;此外我觉得模板的种类和质量还有一定关系,不同物种因为GC含量有所区别所以扩增效率也会有所差别。最后,我最喜欢用PE9600了,我几乎从未在它上面失过手,比PRE9700还好用,真不愧为\"PCR至尊

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