高人 我将原核细胞基因在真和细胞中表达需要哪些人工修饰 谢谢高人了。万分感谢。 可以直接转染试试，如果表达量不能达到需要，可以注意两点：一是在起始密码子前加kozak序列。kozak序列是指位于起始密码子前面，可以影响基因表达水平的六个碱基，以-6位和-3位影响最大。通常用GCCACCATG就可以，这里的GCCACC就是kozak序列，ATG就是起始密码子。用这个kozak序列，通常表达水平就能达到要求。二是优化密码子，原核细胞偏爱第三位是AT的密码子，真核细胞偏爱第三位是GC的密码子。如果加了kozak序列表达水平仍然很低，可以用真核细胞偏爱的密码子代替原来的密码子。
原核表达载体和真核表达载体的区别 一、表达载体2113不同：原核表达载体构建重5261组表达载体：41021、载体酶切：将表达质粒用限制性内1653切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体，具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因。二、表达实现方式不同：原核表达载体测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。真核表达载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。三、获得目的基因方式不同：pEGFP-N1载体从结构上看，质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。原核表达载体获得目的基因：1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因。
真核表达系统与原核表达系统的异同？ 真核表达系统和原核基因表达调控的相同点：1、真核基因与原核基因的调控一样，都是以转录水平调控为最重要；2、结构基因均有调控序列，并依靠特异蛋白因子与这些调控序列的结合与否调控基因的表达；3、都要经历转录、翻译过程；4、表达过程都有复杂性、多环节。真核表达系统和原核基因表达调控的不同点：1、真核基因表达调控过程更复杂；2、在染色质结构上，原核细胞的DNA是裸露的，而真核细胞DNA包在染色体中；3、在原核细胞中的染色质结构对基因的表达没有明显的调控作用，而在真核细胞中染色质的变化调控基因表达，并且基因分布在不同的染色体上，存在染色体间基因的调控问题；4、真核生物中编码蛋白质的基因通常时断裂基因，含有非编码序列，即内含子，因而转录产生的mRNA前体必须剪切加工才能成为有功能的成熟的mRNA，而不同的拼接方式可以产生不同的mRNA。而原核生物的基因由于不含有外显子和内含子，因此，转录产生的信使RNA不需要剪切、拼接等加工过程；5、在原核基因转录的调控中，既有正调控，也有负调控，二者同等重要。而真核细胞中虽然也有正调控成分和负调控成分，但目前已知的主要是正调控，且一个真核基因通常都有多个调控序列，必须有多个激活物。
