实时荧光定量PCR为什么要设定40个循环 40个循环以内就可以将只一个拷贝的DNA也检测出来，这只不过是rt-pcr的普遍设定而已，可以改的。
PCR循环次数是否越多越好？为什么 PCR循环次数通常就是30左右2113。循环数太多了，虽然可5261以一定程度的提高产物4102量，但是由于反应时间过长，有一些非特异产1653物的扩增也会相应增加，而且随着酶的扩增能力下降，合成目标片段的能力也会随之下降，也可能引起其他的非特异扩增。dNTP也会消耗，如果有某一种dNTP消耗比较大，后续扩增就难免会引起错配。所以如果产物已经足够用于后续分析，一般都不太会过度延长循环次数的。
PCR技术获取目的基因时为什么要至少经过3次循环才能从DNA分子中分离出目的基因 一般需要获得的基因是有一定长度的，而模板长度很长.设计的引物决定了扩增产物的长度.第一个循环，引物与模板互补，此时变成两个模板，但因为模板很长，没有什么终止扩增，所以第一个循环扩增出来的新片段很长很长.第二个循环以新的长片段为模板进行，但新片段的一端是引物开头的，所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度，但只是一条链，所以还不能分离出目的基因.第三个循环，当以第二个循环得到的新片段为模板时，因为这个片段的长度就是需要扩增的长度，所以当第三个循环完成时，这个片段是需要的长度，且是双链DNA，这就得到了需要的目的基因了.所以至少要3个循环才能分离出目的基因.
