单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 平板克隆形成实验接种细胞数

有谁知道colony formation assay 1、平板克隆形成试验基本步骤：(1)取对数生长期的单层培养细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，把细胞悬浮在10%胎牛血清的RPMI1640培养液中备用。(2)将细胞悬液作梯度倍数稀释，以适当的细胞密度(根据增殖能力)接种于培养皿中。一般分每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5%CO2及饱和湿度的环境下，静置培养2～3周。(3)经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加纯甲醇或1：3醋酸/甲醇5mL，固定15分钟。然后去固定液，加适量Giemsa应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。(4)将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆数克隆形成率=—×100%接种细胞数平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。2、软琼脂培养克隆形成试验基本步骤：(1)取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻。克隆形成试验的问题 博凌科为解答：做克隆形成实验首先需要在平皿或孔板中接种相同数量的处理过的细胞，所以需要计数细胞后再种于平皿或孔板中。如果在放疗之前就接种细胞，则经过放疗后，就 不能保证成活的细胞数量是相同的，因而在计算克隆形成率时分母则不一致。而计数活细胞的目的是为了将经过放疗后已经死亡的细胞过滤掉，只计数活细胞，将活 细胞种于平皿或孔板中。经过大概两周的时间，观察细胞的克隆形成情况，克隆形成超过50个的计为一个克隆，计数不同处理的细胞可克隆形成个数，从而得到不 同放疗剂量对细胞的影响程度。克隆形成实验 怎样才算是克隆 做克隆形成实验首先需要在平皿或孔板中接种相同数量的处理过的细胞，所以需要计数细胞后再种于平皿或孔板中。如果在放疗之前就接种细胞，则经过放疗后，就 不能保证成活的细胞数量是相同的，因而在计算克隆形成率时分母则不一致。而计数活细胞的目的是为了将经过放疗后已经死亡的细胞过滤掉，只计数活细胞，将活 细胞种于平皿或孔板中。经过大概两周的时间，观察细胞的克隆形成情况，克隆形成超过50个的计为一个克隆，计数不同处理的细胞可克隆形成个数，从而得到不 同放疗剂量对细胞的影响程度。单克隆抗体是由什么细胞产生 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细胞融合。平板克隆形成和软琼脂克隆形成的区别？ 细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。平板克隆形成和软琼脂克隆形成主要是实验步骤和方法的区别和适用情况的区别。平板克隆形成实验基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5%CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率=（克隆数/接种细胞数）×100%平板克隆形成。集落形成和细胞增殖实验有什么区别 细胞集落形成实验2113非整倍体无限细胞5261系和癌细胞株中，仍4102然存在不同细胞亚群，它们的1653功能和生长特点有些差异，其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力，细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞，细胞遗传性状、生物学特性相似，利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系，细胞集落率很低。细胞集落化培养之前，应先测定细胞集落形成率，以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。目前认为仅有肿瘤干细胞具有形成集落的能力，集落抑制率常用于抗癌药物敏感试验、肿瘤放射生物学试验。集落抑制率=（1-（实验组集落形成率/对照组集落形成率））×100%（一）原理细胞集落形成率 单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，称为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞，大小在0.3-1.0mm 之间。集落形成率表示细胞独立生存能力。常用方法有平板集落形成试验、软琼脂集落形成试验。（二）实验用品1.材料：Hela细胞。2.器材：（直径 60mm）培养皿、细胞记数板、烧杯、吸管、离心机、离心管、废液瓶、倒置显微镜、二氧化碳培养箱、超净工作台、水浴锅。3.试剂：Giemsa染液、0.25%胰蛋白酶消化液、血清细胞。平板接种的方法，平板接种即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后培养。平板接种的目的是观察菌落形态，分离纯化菌种，。细胞克隆形成实验试验步骤 细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状

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