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物理图谱的步骤 物理图谱连锁图谱

2021-04-26知识24

物理图谱的步骤 用部分酶解法测定DNA物理图谱包括两个基本步骤:(1)完全降解:选择合适的限制性内切酶将待测DNA链(已经标记放射性同位素)完全降解,降解产物经凝胶电泳分离后进行自显影,获得的图谱即为组成该DNA链的酶切片段的数目和大小。(2)部分降解:以末端标记使待测DNA的一条链带上示踪同位素,然后用上述相同酶部分降解该DNA链,即通过控制反应条件使DNA链上该酶的切口随机断裂,而避免所有切口断裂的完全降解发生。部分酶解产物同样进行电泳分离及自显影。比较上述二步的自显影图谱,根据片段大小及彼此间的差异即可排出酶切片段在DNA链上的位置。下面是测定某组蛋白基因DNA物理图谱的详细说明。

物理图谱的产生 该基因全长5900bp,用限制酶HpaⅡ完全降解该DNA可产生五个大小不等的片段,电泳分离并参照已知分子量的标准DNA带,得知这些片段的大小分别为1930、1690、1020、950和310bp。不难推测该DNA上有四个HpaⅡ切口,但切口的位置和这五个片段在完整基因中的排列顺序此时尚无法知道。接着将末端标记的该DNA片段进行HpaⅡ的部分降解,由于各切口随机断裂,产生的片段数显然会多于完全降解产物。但电泳后的自显影图上只可能出现末端标记的DNA片段。若以待测DNA在左端为标记处,那么自显影图上将呈现4210、3260、2950和1020bp四条带。其中最小片段(1020bp)与完全降解产物为同一片段,它应定位于该基因的左端;而最大片段(4210bp)与完整基因(5900bp)之差的片段(1690bp)无疑应定位于该基因的右端;余下的三个片段(1930、930和310bp)的定位,根据部分酶解的相邻片段之差很易确定。据此推出的这五个片段在该基因上的排列顺序是(左→右):1020-1930-310-950-1690。物理图谱与DNA测序的原理颇为相似,二者是通过片段长度来推测位置,所不同的是测序确定核苷酸(碱基)的位置,而此处是确定某个片段的位置。DNA物理图谱测定后,便可对每一酶切片段进行核苷酸顺序分析。在测定了所有。

基因组物理图谱,遗传图谱有什么区别,有何用途?

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