ZKX's LAB

PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因?marker的条带正常. PCR产物拖带弥散且无目标条带

2021-04-26知识7

PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么 首先怀2113疑,特异性不好,解5261决办法:1,可能是模4102板量过高1653,降低模板浓度10-1000倍;版2,适当提高退火温度1-3度,或权者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环(也就是在程序中多设置2步);3,稍降Mg离子浓度,如果以前加1.5ul的,试试1-1.2ul;如果以上方案还不能解决,就要检查你的模板、引物和taq,重新提模板、重新稀释引物,以及用新的pcr试剂。若有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝实验顺利!

PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾 “从头2113拖到尾,另外一对引物就5261能做出来”说明4102不是引物之间形成1653二聚体版,而是第一权对引物的设计有问题(特异性很差)。如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放。如果你没有好的设计软件,建议到Primer3去试试(目前最好的免费引物设计)。如果还是不行,把序列发给我,我帮你设计(我有专业软件,ABI primer express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10)

PCR产物检测不亮且有弥散现象是什么原因 有几个原因2113。1,PCR本身出的问题,不是5261说PCR机子。也许4102引物没设计好,1653也可能是退货温度专选的不是最合属适。2,DNA加的太浓。一般25微升体系,DNA总量不宜超过100ng。3,凝胶没有制好。一般现制现用,倒好了不宜在外面放超过2小时。第一个可能性最大。

#PCR产物拖带弥散且无目标条带

随机阅读

qrcode
访问手机版