crispr-cas9基因敲除小鼠原理 最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：figwuhuaguoCRISPR-CAS9基因敲除原理CRISPR/Cas9（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats）是最新出现的一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的e79fa5e98193e78988e69d8331333433623766技术。CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。在这一系统中，crRNA（CRISPR-derivedRNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activatingRNA）结合形成双链RNA，此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA进行修饰的目的。Cas9结合gRNA，gRNA的长度约为80个核苷酸，包含两个区域：gRNA5'端前20个核苷酸对应于靶标DNA，能结合在靶DNA上的约60个核苷酸（gRNA长度取决于表达gRNA的质粒）形成一个发夹结构，这个结构能帮助gRNA与Cas9结合，并由此指导与DNA的结合。通过gRNA上的靶点序列，在目标基因组上找到靶点序列，并揭开双螺旋，Cas9将剪切DNA双链，造成DNA双链断裂。Cas9使用简单，可满足多个靶点同时操作。基因敲除小鼠流程：
哪里可以做CRISPR/Cas9基因敲入小鼠，有谁做过 哪里可以做CRISPR/Cas9基因敲入小鼠2113，有5261谁做过是的，确切来说是大量表达。4102 大肠杆菌是基因重组技术中常用1653的细菌，将外源目的基因(如人胰岛素基因)导入大肠杆菌后可在大肠杆菌内表达目的蛋白(如胰岛素)，由于细菌繁殖速度快，通过发酵便可在短时间内获得大量胰岛素，再经多步分离、纯化便得到了药用胰岛素。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
CRISPR-Cas9 ，基因编辑技术治疗癌症， 没有在动物身体实验， 直接进行人体实验吗？ http：//www. ncbi.nlm.nih.gov/pubmed /25690852 最后说一句，要想获得正确的知识，知乎并不是最佳选择，学习使用科学文献检索才是王道。发布于 2016-08-13 ？ 16 ？ ？。
