基因工程中有哪些常用的工具酶，他们各自的主要作用是什么？ 基因工程中常用的工具酶有：限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类，各自的主要作用如下：1、限制酶：可以识别并附着特定的脱氧核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割。2、聚合酶：可以专门生物催化合成脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一类酶。3、连接酶：作用是催化两种大型分子以一种新的化学键结合一起的酶，一般会涉及水解其中一个分子的团。4、修饰酶：能催化稀有碱基参入RNA或DNA，或对原有碱基进行修饰的酶。以防止限制性内切酶的破坏。体内有些酶可在其他酶的作用下，将酶的结构进行共价修饰，而使其在高活性形式和相对较低的活性形式之间互相转变，这种调节称为共价修饰调节。5、核酸酶：是能够将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断的酶，核酸酶属于水解酶，作用于磷酸二酯键的P-O 位置，核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之间的磷酸二酯键的一种核酸。在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的。参考资料来源：—限制酶参考资料来源：—聚合酶参考资料来源：—连接酶参考资料来源：—修饰酶参考资料来源：—核酸酶
分子克隆中常用的工具酶有哪几种 分子克隆中常用的工具酶连接酶、T4 多核苷酸激酶、碱性磷酸酶、核酸酶、琼脂糖酶、蛋白酶、溶菌酶以及一些DNA 结合蛋白。具体如图：
微生物代谢工程中常用的基因操作技术有哪些 微生物的基因操作技术有：核酸的凝胶电泳、核酸的分子杂交技术、DNA 序列分析、基 因的定点诱变、细菌的转化、利用 DNA 与蛋白质的相互作用进行核酸研究、PCR 技术等。基因定点突变(site-directed mutagenesis)：通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编 码的氨基酸序列，用于研究氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响，也可用于改造 DNA 调控元件特征序列、修饰表达载体、引入新的酶切位点等。主要采用两 种 PCR 方法，包括重叠延伸技术和大引物诱变法。在硫化细菌核苷水解酶对底物专一性的研 究中，采用定点突变技术，对编码 221 位和 228 位氨基酸的 DNA 序列进行突变，改变两个位点的氨基酸，从而研究氨基酸残基对底物结合的影响。基因敲除(gene knock-out)：又称基因打靶，通过外源 DNA 与染色体 DNA 之间的同源重 组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体 DNA 可与目的片段共同稳定 遗传等特点，可分为完全基因敲除和条件型基因敲除。在谷氨酸棒杆菌生产缬氨酸的研究中，采用基因敲除的方法进行高产菌株构建。如 ilvA 基因敲除，使苏氨酸脱氨酶的合成减少，降低异亮氨酸合成的前体，从而减少异亮氨酸的合成，增加。
