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mtt种板 细胞接种密度 MTT实验中的注意事项

2021-04-24知识5

做MTT时细胞的接种密度对实验结果有什么影响呢? 你的解释是有道理的。处于对数生长期的细胞对药物是最敏感的,而对数生长期的细胞就是似满非满,长得太满的细胞肯定已过对数生长期,你要对接种的细胞浓度摸索一下,细胞。

贴壁细胞mtt试验原理及方法步骤是什么? MTT原理\\x09MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝.是一种黄颜色的染料.\\x09MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法.其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能.二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量.在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比.该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等.它的特点是灵敏度高、经济.缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测.这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害.MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml.因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可.在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住.实验。

做悬浮细胞的MTT,用酸化异丙醇溶解结晶测的吸光度都非常低,什么原因呢?我做的是悬浮细胞的MTT,因为细胞趋向凋亡,接种密度比较高,有三种,分别是10000个/孔、100000个/孔、500000个/孔,加10微升 MTT培养4小时后,用酸化异丙醇溶解结晶,但是测的吸光度都非常低,只有0.005左右,请问是什么原因呢?

#mtt种板 细胞接种密度

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