如何判定荧光定量结果的真实性？ 我是南农的一名小博，一直在用promega的荧光定量试剂做荧光定量实验。自认为对荧光定量实验有充分的了解…
PCR实验测定 定性应该较容易理解2113，大体是有或5261无，强和弱，要达到4102目的做常规PCR，通过产物条1653带很容易看出。定量现在一般分为半定量PCR和real-time PCR（实时定量PCR）两种。半定量做法就是通过常规PCR，跑胶得到产物条带，然后通过软件对条带进行分析，将条带的强弱进行量化。real-time PCR定量更准确，它需要特定的仪器与试剂。原理是在PCR进行延伸的过程中其产物加上特定的荧光标记，然后通过机器读出荧光的强度来反应检测的样本中c-DNA的丰度。
PCR结果没有条带，都是弥散的，这是为什么 首先怀疑，特异性不好，解决办法：1，可能是模板量过高，降低模板浓度10-1000倍；2，适当提高退火温度1-3度，或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环，再用先前温度p剩余的循环（也就是在程序中多设置2步）；3，稍降Mg离子浓度，如果以前加1.5ul的，试试1-1.2ul；如果以上方案还不能解决，就要检查你的模板、引物和taq，重新提模板、重新稀释引物，以及用新的pcr试剂.欢迎继续讨论，纯属手打，祝实验顺利。
