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测定微生物的生长有哪些方法?各有何优缺点 测定微生物最适生长温度试验

2020-07-18知识11

细菌的动力试验是怎么做的 首先需要配置好半固体培养基(半固体培养基相对于固体培养基,琼脂 含量少而显得稀薄,利于有动力的细菌生长扩散)。接种时,使用接种针挑取少许待检细菌,竖直做一个穿刺测试微生物限度的培养基灵敏度如何测定? 杭州微球生物技术有限公司有培养基灵敏度指示剂,是什么菌,如何指示?微生物菌体浓度的测定方法有哪些 微生物菌体浓度的测定方法:活菌计数法此法能准确地判断菌液浓度,但有明显的滞后性,无法在第一时间内2确定其实际浓度,待结果出来后,再开始检测,菌的活性将有所下降,给实验室操作带来诸多不便;比浊法此法能快速地判断菌液浓度,但为粗略的估计值,受限于各人肉眼的观察,误差较大,准确性不高。微生物菌体浓度的测定(纤维制品的抗菌性试验方法为例)一、菌种:大肠杆菌(EscherichiacoliATCC8099)二、试剂与仪器蛋白胨牛肉膏氯化钠Cary100紫外—可见光分光光度计三、培养基营养细菌培养基NB。蛋白胨5g,牛肉膏粉3g,蒸馏水1000mL,pH6.8±0.2。营养琼脂培养基NA。蛋白胨5g,牛肉膏粉3g,琼脂粉15g,蒸馏水1000mL,pH6.8±0.2。1、对数生长期菌液的制备取在规定保存代数之内的供试菌种,在火焰旁,挑取一铂金环,在营养琼脂培养基上划线,于37℃±1℃培养24h后,在平板上挑取饱满的单菌落,置于20mL营养细菌培养基中,振荡(110r/min,振幅3cm)培养24h。2、稳定期菌液的制备取培养好的对数生长期菌液0.4mL,于20mL营养细菌培养基中,再振荡培养4h,即为稳定期菌液。四、吸光度(ABS值)的测定取培养好的稳定期菌液,按不同的设定稀释倍数(5、10、20、40倍),依次进行稀释,(稀释液为药敏试验报告中S、I、R是什么意思 S(susceptible)是指2113细菌对抗菌药敏感,使用常5261规剂量时的平4102均血浓度超过MIC 5倍以上,用常规剂量通常有效;I(intermediate)是指细1653菌对抗菌药中度敏感,常规剂量时平均血浓度等于或略高于MIC,需用高剂量或对体内药物浓缩部位的感染可能有效;R(resistance)是指细菌对某种抗菌药耐药,药物对细菌的MIC 高于应用常规剂量时的血浓度,应用常规剂量治疗通常无效。药敏试验简称药物敏感试验(或耐药试验)。旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感(或耐受)程度,以指导临床合理选用抗生素药物的微生物学试验。一种抗生素如果以很小的剂量便可抑制、杀灭致病菌,则称该种致病菌对该抗生素“敏感”。反之,则称为“不敏感”或“耐药”。为了解致病菌对哪种抗菌素敏感,以合理用药,减少盲目性,往往应进行药物敏感试验。其大致方法是:从病人的感染部位采取含致病菌的标本,接种在适当的培养基上,于一定条件下培养;同时将分别沾有一定量各种抗生素的纸片贴在培养基表面(或用不锈钢圈,内放定量抗生素溶液),培养一定时间后观察结果。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同,在药物纸片周围便出现不同大小的抑制病菌生长而形成的“空圈”,称为抑菌圈微生物学试题。今天看到一句话,能否在麦康凯上生长是鉴别非发酵菌的依据。请问,非发酵菌能在上边生长, 非发酵菌主要是指一群不发酵或不分解糖类的革兰阴性无芽胞需氧杆菌。目前,非发酵菌包括13个属。主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。这些细菌大多为条件致病菌。对于非发酵菌的鉴定,必须首先进行种属间的鉴别,然后进行种间的鉴定。一般实验室只需用几项试验,如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%~95%分离的菌株作出初步鉴定。1.培养温度多数非发酵菌适宜生存于自然界,培养温度以30℃为宜。有的更适宜生长于室温(18~22℃)。故常规标本应先培养于35~37℃,再培养于30℃或室温。2.动力与鞭毛在非发酵菌的鉴定中,细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。由于非发酵菌大部分为专性需氧菌,在半固体培养基上观察动力不明显,因细菌在琼脂表面生长,底层穿刺生长不良或不生长,故观察非发酵菌的动力以30℃或室温l2~24h培养物悬滴法为准。有时需借助鞭毛染色予以鉴定。3.氧化酶试验该试验是鉴定非发酵菌的重要试验,非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外,氧化酶试验均为阳性。4.氧化一发酵(O-F)试验本试验是确定非发酵菌与发酵菌测定微生物的生长有哪些方法?各有何优缺点 常用测定微生物生长的方法有:1)、称干重法.可用离心法或过滤法测定.优点:可适用于一切微生物,缺点:无法区别死菌和活菌.2)、比浊法.原理:由于微生物在液体培养时,原生质的增加导致混浊度的增加,可用分光光度计测定.优点:比较准确.3)、测含氮量,大多数微生物的含氮量占干重的比例较一致,根据含氮量再乘以6.25即可测得其粗蛋白的含量.4)、血球计数板法.优点:简便、快速、直观.缺点:结果包括死菌和活菌.5)、液体稀释法.对未知菌样作连续的10倍系列稀释,经培养后,记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查MPN表,再根据样品的稀释倍数就可计算其中的活菌含量.优点:可计算活菌数,较准确.缺点:比较繁琐.6)、平板菌落计数法.取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基,经培养后计算原菌液的含菌数.优点,可以获得活菌的信息.缺点:操作繁琐,需要培养一定时间才能获得,测定结果受多种因素的影响.100℃ 开水能不能杀死微生物?为什么? 很好奇之前好像看纪录片说过一些微生物是不会被100℃热水杀死的。那么事实呢?100℃热水真的没办法杀死…微生物实验室的基本配置要求,我们所说的微生物学实验室是生物学领域的一个基本实验室。那么我们对于一个完备的微生物学实验室,我们需要配置哪些仪器呢?温度对生物发酵过程的影响和利用 温度是微生物生长的重要环境条件之一。尽管从总体上看微生物生长和适应的温度范围从-12~100℃或更高,但具体到某一种微生物,则只能在有限的温度范围内生长,并具有最低、最适和最高3个临界值(图7-10和表7-8)。1.温度对微生物的作用温度对微生物生长速率的影响见图7-10。总的来讲,温度是通过影响微生物膜的液晶结构、酶和蛋白质的合成与活性,以及RNA的结构和转录等影响微生物的生命活动。具体表现在两个方面:一方面,随着微生物所处环境温度升高,微生物细胞中的蛋白质和酶活性增强,生物化学反应加快,生长速率提高;另一方面,随温度上升,微生物细胞中对温度较 敏感的组成成分(如蛋白质、核酸等)会受到不可逆的破坏。超过最适温度以后,生长速率 随温度升高而迅速下降。温度对生长速率的影响在最低温度和最适温度之间,微生物的生长速率随温度的升高而增加,通常以温度系数Q10来表示二者的关系,即温度每上升10℃,微生物的生长速率与未升温前的生长速率之比。高温微生物的Q10在2以上,中温微生物Q10约为2,低温微生物Q10在2以下。最低温度是微生物生长的下限,低于该温度微生物将停止生长。反复冻融会使细胞内的水分变成冰晶,造成细胞明显脱水,此外药品领域的微生物检测及标准 中国药典微生物限度检查法,为《中国药典》附录收载的关于药品微生物检查的法定方法。药品的不同剂型的微生物检测标准不同,具体如下:1、制剂通则品种制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂应符合无菌检查法规定。2、口服给药制剂细菌数每1g不得过l000cfu。每lml不得过100cfu。霉菌和酵母菌数每lg或lml不得过100cfu。大肠埃希菌每1g或lml不得检出。3、耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂细菌数每1g、lml或l0cm2,不得过100cfu。霉菌和酵母菌数每1g、lml或l0cm2,不得过10cfu。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每1g、lml或l0cm2不得检出。大肠埃希菌鼻及呼吸道给药的制剂,每1g、lml或l0cm2,不得检出。4、阴道、尿道给药制剂细菌数每1g、lml或l0cm2,不得过100cfu。霉菌数和酵母菌数每1g、lml或l0cm2应小于10cfu。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm2,不得检出。5、直肠给药制剂细菌数每1g不得过l000cfu。每lml不得过100cfu。霉菌和酵母菌数每1g或lml不得过100cfu。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每lg或lml不得检出。6、其他局部给药制剂细菌数每1g、lml或l0cm2不得过100cfu。霉菌和酵母菌数每1g、lml或l0cm2不得过100cfu

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