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纤维素酶活性 纤维素酶的分离纯化及酶活性测定

2021-04-23知识7

纤维素酶活性 纤维素酶是水解纤维素生产葡萄糖及纤维二糖的一类酶的总称。包括C1酶、CX酶及纤维二糖酶。C1酶使天然纤维素晶体分链,成为直链纤维素。CX酶不能水解天然纤维素,但能分解直链纤维素β-1,4糖苷键生成纤维二糖。纤维二糖经过纤维二糖酶作用生成葡萄糖。以羧甲基纤维素钠盐(简称CMC)作为纤维素酶作用的底物。但需要指出的是CMC无论在结构上还是在性质上都不同于天然纤维素,天然纤维素不溶于水,而CMC有很强的亲水性,非常容易被纤维素酶分解。在相同条件下,同一种纤维素酶分解CMC所产生的还原糖远大于水解天然纤维素所产生的还原糖。操作方法pH值为4.6的柠檬酸缓冲浓浓度为0.1mol/l的柠檬酸溶液26.7ml和浓度为0.2mol/l的磷酸氢二钠溶液23.3ml,混合后加水稀释到1000ml。pH值为5.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液取浓度为0.2mol/l的磷酸氢二纳溶液25.7ml和浓度为0.1mol/l柠檬酸溶液24.3m1,混合后加水稀释至 1000ml。羧甲基纤维素钠盐溶液称取CMC 1g,加水1000ml,在水浴中加热溶解,再加入20mlpH值为5.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液和 40ml水,混匀。样品酶活的测定取纤维素酶粉5g,充分碾细,加100ml蒸馏水,与40℃水浴中,搅拌3Omin,使酶蛋白充分溶出,过滤,离心取上。

纤维素酶产生菌的分离和筛选 从土壤中分离22株菌株,采用透明圈法筛选和摇床液体发酵试验,对筛选菌株进行了滤纸酶活性、脱脂棉酶活性、cmc酶活性、β-葡萄糖苷酶活性测定,筛选出1株产纤维素酶活性较高的菌株(522a),并通过正交试验,确定该菌株的最优产酶条件.每种土样每个浓度各做三个重复,以做对照

离子交换纤维素有何特点?为什么人们常用它来分离纯化酶及其他生物活性大分子物质? ⑴具有开放性支持骨架,大分子可以自由进入和迅速扩散,故吸附容量大。⑵具有亲水性,对大分子的吸附不大牢固,用温和条件使可以洗脱,不致引起蛋白质变性或酶的失活。。

#纤维素酶的分离纯化及酶活性测定

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