如何利用有机溶剂萃取的优点，来进行蛋白质的分离提取呢？ 一、根据分子大小不同的纯化方法1.透析和超过滤透析（dialysis）是利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质分开。常用的半透膜是玻璃纸或称赛璐玢纸（cellophane paper）、火棉纸（celloidin paper）和其它改型纤维素材料。2.密度梯度离心3.凝胶过滤凝胶过滤（gel filtration，GF），又称分子排阻层析，利用某些凝胶对不同组分因分子大小不同而阻滞作用不同的差异而进行分离的一门层析技术。其作用机理类似于筛子，是大分子的蛋白质先被洗脱出来，而后是小分子，故又叫分子筛。凝胶过滤也称排阻凝胶层析、凝胶层析和分子筛层析。它是20世纪60年代发展起来的一种层析技术。凝胶层析的基本原理是利用被分离物质分子大小的不同以及固定相（凝胶）具有分子筛的特点，将被分离物质各成分按分子大小分开，达到分离的目的。二、利用溶解度差别的纯化方法1.等电点沉淀和pH控制2.蛋白质的盐溶和盐析3.有机溶剂分级分离法4.温度对蛋白质溶解度的影响等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质。
如何测定在不同ph值中蛋白质的稳定性 可以检测蛋白质在不同ph值中去折叠的拐点温度，即Tm值。可以用的检测方法：差示扫描量热（DSC)-问题：蛋白用量大，时间长差示扫描荧光（DSF）-基于检测蛋白质的内源荧光，可用nanotemper公司的tycho进行检测，蛋白用量少，3分钟即可出结果。
蛋白质分离提纯方法 1、盐析法：盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。2、有机溶剂沉淀法：有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。3、蛋白质沉淀剂：蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。4、聚乙二醇沉淀作用：聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。扩展资料：吸附层析1、吸附柱层析吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。2、薄层层析薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸层析操作进行展层。3、聚酰胺薄膜层析聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时，展。
