，3'5，5'-四甲基联苯胺比色法 方法提要在pH>；2的酸性溶液中，余氯与3，3'，5，5'-四甲基联苯胺(以下简称四甲基联苯胺)反应，生成黄色的醌式化合32313133353236313431303231363533e4b893e5b19e31333433616235物，用目视比色法定量。本法检测下限为0.005mg/L余氯。含量>；0.12mg/L铁和0.05mg/L亚硝酸盐对本法有干扰。试剂氯化钾-盐酸缓冲溶液(pH2.2)称取3.7g经100～110℃干燥至恒量的KCl，用纯水溶解，再加0.56mLHCl，并用纯水稀释至1000mL。3，3'，5，5'-四甲基联苯胺溶液(0.3g/L)称取0.03g3，3'，5，5'-四甲基联苯胺(C16H2ON2)，用100mL0.1mol/LHCl分批加入并搅拌使试剂溶解(必要时可加温助溶)，混匀，此溶液应无色透明、贮存于棕色瓶中，在常温下可保存6个月。重铬酸钾-铬酸钾溶液称取0.1550g经120℃干燥至恒量的重铬酸钾(K2Cr2O7)及0.4650g经120℃干燥至恒量的铬酸钾(K2CrO4)，溶于KCl-HCl缓冲溶液中，稀释至1000mL。此溶液生成的颜色相当于1mg/L余氯与四甲基联苯胺生成的颜色。EDTA二钠盐溶液(20g/L)。余氯标准系列(0.005～1.00mg/L)按表81.4所列用量分别吸取K2Cr2O7-K2CrO4溶液，注入50mL具塞比色管中，用KCl-HCl缓冲溶液稀释至50mL，在冷暗处保存可使用6个月。表81.4 0.005～1.0mg/L余氯标准。
配制的四甲基联苯胺溶液为什么会变成黄色的 恐怕是被氧化成类似于肼的结构了吧，四甲基联苯胺很容易被氧化的，尤其是在有酶的时候。就像苯酚可以被氧化成醌一样，形成了大的共轭体系，导致出现颜色并进一步变深。
四甲基联苯胺的应用 TMB的反应产物为深蓝色，利于光镜观察，且反应产物越聚越大，常超出单个细胞器的范围（而DAB则被限制在其内），故TMB反应的检测阈较低。由于上述优点，目前TMB常用于光镜及超微结构水平的HRP及HRP-WGA神经投射的研究。需要注意的是：TMB显色液中的A液和B液应在2h内新鲜配制。另外，TMB是一种较强的皮肤刺激剂，并有致癌的潜在可能，故使用时应带手套及在通风条件下操作。TMB经HRP作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有无致癌性等优点，因此在ELISA中应用日趋广泛。酶反应用HCL或H2SO4终止后，TMB产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为450nm。ABTS虽不如OPD和TMB敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒所采用
