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什么是免疫蛋白印迹(WB)试验 wb试验转膜夹不紧的后果

2021-04-23知识1

wb实验中,为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致?同样的电压可以吗 PH值不同,前者主要表现为浓缩效用,后者表现为电荷效用和分子筛效用.浓缩效应主要在浓缩胶中完成,浓缩胶的pH6.8在这个pH条件下,缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离,Gly的等电点为6.0仅少数解离为负离子,在电场中移动速度很慢.酸性蛋白质在此pH下解离为负离子,三类离子的迁移速率为Cl一般蛋白质Gly电泳开始后,Cl离子泳动快,在其后留下一个低离子浓度区.Gly在电场中移动很慢,造成移动离子的缺乏,于是快慢离子间就形成了一个缺少离子的高压区,在高压区内所有的负离子都会加速移动,当移到Cl离子区域时,高电压消失,蛋白质的移动速度慢下来,当以上稳定状态建立后,蛋白质样品在快慢离子间被浓缩形成一个狭小的之间层,并按蛋白质所带负电荷量的多少依次排列成带,浓缩样品,从浓缩胶进入分离胶后,胶的pH升高,Gly的离解度增大,泳动率上升,又因为它分子小,故超过所有的蛋白质分子,紧跟在Cl离子后,Cl离子迁伍迟移后,低离子浓度不再存在,形成了恒定的电场强度,因此,蛋白隐郑质样品在分离胶中的分离主要取决于它的电荷性质,分子大小和形状,分离胶的孔径有一定大小,对不同相对质量的蛋白质来说,通过时收到的滞阻作用不同,即使静电荷相等的灶橘颂颗粒,也会由于这种分子筛的效应。

WB实验转膜的湿转和半干转、干转 一般就只有湿转和半干转,据说最近出了一种新的WB的仪器:7分钟完成Western的转印http://www.ebiotrade.com/newsf/2009-10/20091012145906878.htm也是半干的|湿转是一种。

WB实验中,marker为什么可以转到膜上?WB实验中,marker为什么可以转到膜上?marker分几类:1.不预染marker,2.预染marker,3.WB分子量指示marker。marker也是有不同分子量。

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