提取基因组dna时所用到的主要试剂,它们分别起什么作用 主要成分是:NaCl,Tris-HCl(PH=8),EDTA(PH=8),SDS.NaCl,Tris-HCl主要是调节溶液的PH,维持一定的离子浓度。EDTA主要是二价 金属离子 的螯合剂,使影响DNA的DNA酶中的 。
人类基因组DNA跑电泳一般用什么浓度的胶 总体原则是:分子量大的2113DNA,电泳时使用浓度较小的凝5261胶反之4102亦反。胶浓度越大,电泳速度越小;若1653胶浓度偏高,可能跑不动,条带缩在一起;若胶浓度过低,可能跑得太快,同样分不开。可参考下面的对应关系:凝胶浓度(%)线性DNA长度(bp)0.5 1000~300000.7 800~120001.0 500~100001.2 400~70001.5 200~30002.0 50~2000要看如何处理了DNA
ffpe 提取dna 一般浓度和纯度是多少 rtpcr时提取rna的浓度和纯度要求:浓度20ng/ul以上足够了,如果用的是组织提取,浓度一般很高,可以达到几百甚至几千。如果你用的是病毒、少量细胞,浓度低一些也没有关系。纯度需要用仪器测一下。260/280理论值应该有2.0以上,260/230值1.2以上基本合格。RT-PCR:最重要的是RNA是否有明显降解,这个需要跑电泳看。一般来说28S应该比18S亮1.5-2.0倍,说明提取得不错。反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)是将RNA的反转录(reverse transcription)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。