若在细胞内(体内)表达的蛋白质一二聚体或四聚体的形式存在,设计实验使蛋白质在体外以二聚体形式表达 首先构建蛋白质突变载体,确定导致四聚体的结构域,然后再此结构与中做点突变,敲掉它形成四聚体的能力,而不影响其形成二聚体。然后再体外表达二聚体形式的突变蛋白。
为什么核糖体二聚体不能合成蛋白质 核糖体合成蛋白质时都是以多聚核糖体的方式进行合成的,提高了蛋白质的合成效率,两个单核糖体聚合成二聚核糖体是形成多聚核糖体的过程
如何判断蛋白质是单体还是二聚体 可以通过非变性电泳来判断蛋白质是单体还是二聚体,非变性电泳就是Native-PAGE,区别于正常的SDS-PAGE就是不加入SDS 和疏基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。根据Native-PAGE跑出的蛋白分子量与理论分子量对比可以判断是否为单体还是二聚体。一般是分别测定天然蛋白的分子量和亚基分子量,除一下就知道了。测定亚基分子量就用SDS-PAGE。这时蛋白质是变性的,亚基分开。测定寡聚蛋白分子量可以用分子筛层析,有专门的层析用的marker,根据洗脱体积计算分子量。如果收集各个组分去跑SDS电泳的话,得到的是亚基分子量。要用非变性电泳测分子量也可以,但比较麻烦。因为非变性条件下,电泳速度与分子形状、电荷和分子量都有关系,分子形状好办,电荷难办。所以需要在不同凝胶浓度下,确定出蛋白的Rf值,绘制曲线来计算分子量,所以不推荐。