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TaqDNA聚合酶的校对活性 dna聚合酶校对活性

2021-04-23知识2

DNA聚合酶I有哪些活性? emphasis:role=italicE.coliemphasis:DNA聚合酶I为单链多肽,分子量109ku,有四种活性。(1)5′3′DNA聚合酶活性:反应底物为单链DNA及引物(带3′-OH基)或5′突出的双链DNA。(2)5′3′外切核酸酶活性:反应底物是双链DNA或DNA∶RNA杂交体,它可从5′端降解双链DNA,也降解RNA∶DNA中的RNA(RNase:H活性)。(3)3′5′外切酶活性:反应底物是带3′-OH的双链DNA或单链DNA,其活性从3′-OH端降解DNA,可被5′3′聚合活性封闭,也可被带5′磷酸的dNMP所抑制。(4)交换(置换)反应:如果只有一种dNTP存在,3′5′外切活性将从3′-OH端降解DNA,然后在该位置发生一系列连续的合成和外切反应,直到露出与该dNTP互补的碱基。总之,在没有dNTP的情况下,外切活性占主导地位,而当存在足够的dNTP时,外切活性和合成活性将处在动态平衡中,结果使得双链DNA成为平末端。

原核生物和真核生物的DNA聚合酶有何不同? 总体而言:1.真核细胞有5种DNA聚合酶,分别为DNA聚合酶α(定位于胞核,参与复制引发具5-3外切酶活性),β(定位于核内,参与修复,具5-3外切酶活性),γ(定位于线粒体,参与线粒体复制具5-3和3-5外切活性),δ(定位核,参与复制,具有3-5和5-3外切活性),ε(定位于核,参与损伤修复,具有3-5和5-3外切活性).2.原核细胞有3种DNA聚合酶,都与DNA链的延长有关.DNA聚合酶I是单链多肽,可催化单链或双链DNA 的延长;DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关;DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多,是促进DNA链延长的主要酶.具体而言:(1)原核生物DNA聚合酶DNA聚合酶Ⅰ.在随从链合成时,先合成了许多冈崎片段,而后由于RNA引物的去除形成了空隙,此时DNA PolⅠ它催化聚合反应,延长了各个片段,从而填补了片段间的间隙,使以上片段得以靠近,为片段连接成长链创造了条件.所以DNA polⅠ的聚合作用主要是在填补随从链片段间空隙上发挥作用.DNA PolⅠ还具有3′5′外切酶活性可识别并去除错误的碱基.这种活性在DNA复制中起了校对功能.DNA PolⅠ的校对活性对DNA复制的准确性起着重要作用.DNA PolⅠ还具有5′3′外切酶活性.5′3′外切酶活性也有修正错误的功能,补充其3′5′外切酶。

热稳定DNA聚合酶与DNA聚合酶有什么区别 最大的区别在2113于热稳定聚合酶5261耐高温,而dna聚合酶不耐高温,我们4102使用的BIOG Taq酶经1653过修饰,一般在95度加热5-10分钟活性中心才会暴露,才会产生聚合作用,这样就能有效避免低温下的模板错配,避免二聚体和非特异扩增。

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