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蛋白二聚化概念 作用 叶绿体的超微结构

2021-04-23知识4

FRET引物是什么 Taqman探针法的出现是定量PCR技术的重要里程碑,之后在此基础上发展出了杂交探针法,以及荧光引物法,是对探针法的不断改进和简化.如果希望全面掌握定量PCR技术的研究人员就不能错过这些定量检测技术.要提到荧光探针或者荧光引物,有一个基础概念需要首先明确,那就是荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET):一对合适的荧光物质可以构成一个能量供体(donor)和能量受体(acceptor)对,其中供体的发射光谱与受体的吸收光谱重叠,当它们在空间上相互接近到一定距离(1—10 nm)时,激发供体而产生的荧光能量正好被附近的受体吸收,使得供体发射的荧光强度衰减,受体荧光分子的荧光强度增强.能量传递的效率和供体的发射光谱与受体的吸收光谱的重叠程度、供体与受体的跃迁偶极的相对取向、供体与受体之间的距离等有关.定量PCR所涉及的荧光探针和荧光引物的检测都这个FRET原理相关.FRET技术原理:罗氏专利的FRET探针又称为双杂交探针,或者LightCycle探针.FRET探针由两条和模版互补、且相邻的特异探针组成(距离1—5bp),上游探针的3`端标记供体荧光基团,相邻下游探针的5`端标记Red 640受体荧光基团.当复性时,两探针同时结合在模板上,供体基团和Red640受体基团紧密。

疏水作用的概念 随着越来越多的蛋白5261质的晶体结构被解析,对蛋白质立体结构的一般规律4102也1653日益清楚。就一个球状蛋白质而言,它们的表面常被一层亲水残基包围,带有疏水侧链的残基原则上处于分子内部,但并不是绝对的。严格地说,整个蛋白质分子由里到外,疏水残基是逐渐减少,亲水残基则不断增多。比较而言,亲水残基出现在分子内部的几率大于疏水残基出现在分子表面的几率。因为很多带有电荷的残基通过正负电荷的相互作用而形成盐键,或者是一些残基的侧链参与氢键的形成,结果削弱了残基的亲水性,使某些侧链的疏水性质更为突出。又例如肽链骨架中肽键内的羰基和亚胺基都有亲水和形成氢键的特性。球状蛋白质表面也存在着一些疏水残基,从能量上看,是处于不稳定状态,它们有变得更为稳定的倾向。这些残基的侧链往往成为蛋白质的活性位点,参与和其它分子的相互作用;或是参与亚基和亚基的相互作用,形成蛋白质的四级结构,或是自身、或是和其它分子缔合。就膜蛋白而言,其肽链中穿越膜的肽段经常是形成两亲性α螺旋或β折叠。它们一个侧面集中了较多的疏水性残基,相对的另一侧面存在着不少亲水性残基。有些膜蛋白具有多个穿越膜的肽段,这些肽段形成的两亲螺旋的疏水。

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