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粗提取DNA的不同方法及其原理 60 热水浴提取DNA的量比对照组

2021-04-23知识7

DNA怎么提取? 就那植物来说吧!原理是一致的。方法不同。1植物组织提取基因组DNA一、材料幼嫩叶子。二、设备移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。三、试剂1、提取缓冲液Ⅰ:100mmol/L Tris·Cl,pH8.0,20mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl,1.5%SDS。2、提取缓冲液Ⅱ:18.6g葡萄糖,6.9g二乙基二硫代碳酸钠,6.0gPVP,240ul巯基乙醇,加水至300ml。3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇4、RnaseA母液5、其它试剂:液氮、异丙醇、TE缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。四、操作步骤:1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ,60℃水浴预热。2.幼苗或叶子5-10g,剪碎,在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中,剧烈摇动混匀,60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高),不时摇动。3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液,颠倒混匀(需带手套,防止损伤皮肤),室温下静置5-10分钟,使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。4.室温下5000rpm离心5分钟。5.仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。6.在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净。

如何判断提取质粒DNA的纯度 1、用紫外分光光度计测浓度和纯度 2、跑电泳看条带

怎么提取人的DNA? 提取口腔粘膜DNA方法1.用清水漱口,使口腔清洁.2.盒内有两管和取样小棍,1号平底及2号尖底.取出1号管,立于桌上,等盖上溶液集中到管底.小心地把盖打开.3.取出带齿的DNA收集小棍,伸入口腔内侧的颊部(位于上下牙齿之间的部位),由后向前不同部位刮六次,再刮另一侧的粘膜取DNA样品.4.将有DNA样品的小棍浸入1号管的溶液中,转动数次,将DNA细胞洗到溶液中.上下转动可使上端残留也收集到管中.5.为保证提取足量的DNA样品,建议用清水洗涤小棍后再用以上方法再刮一次收集到1号管中.此时,溶液应呈混浊.把取样小棍弃掉.6.取出2号管,小心等盖上、瓶比壁溶液都收集到管中(可轻轻甩动).将1号管中的溶液全部倒入2号管中,盖上2号管的螺旋盖并拧紧,上下用力摇10次.7.将2号管置入样品袋中寄回本公司指定的收集站.注意:勿将DNA收集小棍浸到2号管中.如发生此类事件,请用清水反复洗涤口收集小棍后方可再用.

#60 热水浴提取DNA的量比对照组

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