1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次,理论上至少需要几个引物? 如果是双链,第一次循环要1对引物,第二次要2对,第三次4对,第四次要8对.总共15对.上下游引物各15条.如果是单链,第一次循环要1条引物,第二次要1对,第三次2对,第四次要4对.总共7对半.上下游分别8和7条.不过这都是理论,实际上引物要多得多才能P出来。
实时荧光定量PCR为什么要设定40个循环 40个循环以内就可以将只一个拷贝的DNA也检测出来,这只不过是rt-pcr的普遍设定而已,可以改的。
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因 原因如下2113:1、第一个循环扩增5261出来的新片段很长很长。2、第4102二个循环以新的长片段为模板进行,但新1653片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循环完成时,这个片段是需要的长度,且是双链DNA,这就得到了需要的目的基因了。扩展资料:PCR的每个循环过程包括高温变性、低温退火、中温延伸三个不同的事件:1、变性:加热使模板DNA在高温下(94℃左右)双链间的氢键断裂而形成两条单链。2、退火:使溶液温度降至50~60℃,模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合。3、延伸:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dNTP),按5'一3’方向复制出互补DNA。参考资料来源:-PCR技术