革兰氏阳性菌菌落PCR问题我最近也在做菌落PCR验证,我是直接挑单菌落进行PCR验证的,但是电泳不出现条带,胶孔里有明亮物质,100bp处有很多模糊的亮色物,我是一个新手,还望您指教一下,我这种情况应该是破壁的了吧?
(鉴定质粒表达)比较菌落PCR和提质粒酶切这两种方法的优缺点,为什么需要两次鉴定? pcr和酶切其实是从两个方面对同一件事的验证,两个验证都通过就更确证了克隆成功。
重组picz 质粒 怎么进行菌落pcr验证 菌落PCR的话与宿主细胞有关,像大肠杆菌细胞壁为革兰氏阴性,高温加热就会使菌体裂解,质粒逸出。菌落PCR加样操作与普通PCR类似,只有模板由质粒替换为菌落,操作的时候注意不要挑到琼脂糖,琼脂糖会对PCR反应有影响,菌落量的话一般是挑半个菌落,以便PCR结束后,保存阳性对照。菌落PCR程序也与普通程序一样,只是预变形时间延长为10min,以使宿主细胞充分裂解。