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taq dna聚合酶有聚合活性,但是那两个外切活性有么?是只有一个还是两个都没有,求生物高手解答! taq聚合酶活性影响因素

2021-04-23知识6

TaqDNA聚合酶的校对活性 该酶无校对活性,易产生错配碱基。TaqDNA聚合酶的种类a,保真性的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好。普通 Taq 酶的错配率在 10-5 碱基/循环数,而高保真 Taq 酶错配率可降到 10-6 数量级,大大降低了出错的可能性;它适合对 PCR 保真性要求较高的实验,如基因筛选、测序、突变检测等等。高保真 Taq 酶的保真原理是:高保真 Taq 酶具有 3‘到 5’核酸外切酶的活性。市面上主要有两类产品:一类是混合型的高保真酶,将带有 Proofreading 活性的酶与普通 Taq 酶(用于提高扩增效率)混合起来;另一类是单一型的高保真酶。b,热启动Taq酶(高特异Taq酶):在 PCR 第一个循环变性之前,有一个升温的过程,引物和模板会有一些非特异性配对,如果这时 Taq 酶发挥活性,就很容易产生非特异性扩增,由于循环初期模板量非常少,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,就会严重干扰目的片段的扩增,甚至导致特异性条带不能扩出;而热启动 Taq 酶是必需经过高温才能激活的酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,不会产生非特异性扩增,这就大大提高了 PCR 扩增的特异性。c,高耐热Taq酶:对于有些模板变性温度较高,需要时间较长,可能要求高耐热性 Taq 酶,如 。

大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ和Taq酶一样吗?谢谢大家! DNA聚合酶 最早在大肠杆菌中发现,以后陆续在其他原核生物及微生物中找到。大肠杆菌DNA聚合酶,包括DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。DNA-polⅠ在活细胞中的功能,主要是对复制中的。

PCR反应中Taq酶最适温度为75度,为什么把仪器设为72度? 其实虽然tap酶的最适温度在75度,但处于这个温度下酶失活的速度也较72度要快,而72度时,酶的活力与75度相比虽有下降,但对最终结果影响不大而且温度高,不利于引物和模板的结合,也不利于合成出的dna链与模板结合。个人理解,仅供参考。

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