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cscl浮力密度公式 密度梯度离心法 应该怎么操作?

2020-07-18知识12

DNA为什么要在氯化铯中离心 用氯化铯浓盐液,以强大离心力的作用,盐的分子被甩到离心管的底部.同时,扩散作用使溶液中Cs+和Cl-离子呈分散状态,与离心力的方向相反,经过长时间的离心,溶液达到一种平衡CsCl等密度梯度离心中,浮力密度高的是在上面还是在下面? 在密度梯度介质中进行的依密度而分离的离心法.各组分会依其密度分布在与其自身密度相同的液层中.密度梯度可以离心前预先制备(如叠加不同浓度蔗糖、甘油)或在离心中自然形成诺瓦克的简介 病原学:1972年,Kapikian等在美国Norwalk(诺瓦克)镇暴发的一次急性胃肠炎患者的粪便中发现一种直径约为27nm的病毒样颗粒,将之命名为诺瓦克病毒(Norwalk Virus,NV)。此后,世界各地陆续自胃肠炎患者粪便中分离出多种形态与之相似但抗原性略异的病毒样颗粒,均以发现地点命名,如:美国的Hawaii Virus(HV)、Snow Mountain Virus(SMV),英国的Taunton virus、Southampton virus(SV)等,日本的SRSV 1-9等,统称为诺瓦克样病毒(Norwalk-like viruses,NLVs),诺瓦克病毒是这组病毒的原型株。1993年通过分析其cDNA克隆的核酸序列,将诺瓦克病毒归属于杯状病毒科(calici virus)。诺瓦克样病毒成员庞杂,目前已对其100多个分离株进行基因测序。根据RNA聚合酶区或衣壳蛋白区核甘酸和氨基酸序列的同源性比较,将诺瓦克样病毒分为两个基因组:基因组Ⅰ,代表株NV,包括SV等、Desert Shield virus(DSV)等;基因组Ⅱ,代表株SMV,包括HV、Mexio virus(MX)等。诺瓦克样病毒有许多共同特征:①直径26~35nm的小圆结构病毒,无包膜;②分离自急性胃肠炎病人的粪便;③不能在细胞或组织中培养;④基因组为单股正链RNA;⑤在Cscl密度梯度中的浮力密度为(1.36~1.41)g/当溴化乙锭存在时,为什么在CsCl中超螺旋结构分子的浮力密度高于线状分子? 线状分子经超螺旋结合混合溴化乙锭。因此,线状分子的密度的增加比超螺旋的密度增加大得多。密度梯度离心法 应该怎么操作? 密度梯度离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此法的优点是:①分离效果好,可一次获得较纯颗粒;②适应范围广,能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形,能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。此法的缺点是:①离心时间较长;②需要制备惰性梯度介质溶液;③操作严格,不易掌握。密度梯度离心法又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种:(1)差速区带离心法:当不同的颗粒间存在沉降速度差时(不需要像差速沉降离心法所要求的那样大的沉降系数差)。在一定的离心力作用下,颗粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。此法仅用于分离有一定沉降系数差的颗粒(20%的沉降系数差或更少)或分子量相差3倍的蛋白质,与颗粒的密度无关,大小相同,密度不同的颗粒(如线粒体,溶酶体等)不能用此法分离。离心管先装好密度梯度介质溶液,样品液加在梯度介质的液面上,离心时,由于离心力的作用,颗粒离开原样品层,按不同沉降速度向管底沉降,简述核酸的理化性质有哪些 核酸是由许多核苷酸2113聚合成的生物大分5261子化合物,为生命的最基本物质之一。核4102酸广泛存在于所有动1653植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用—其中转运核糖核酸,简称tRNA,起着携带和转移活化氨基酸的作用;信使核糖核酸,简称mRNA,是合成蛋白质的模板;核糖体的核糖核酸,简称rRNA,是细胞合成蛋白质的主要场所。化学性质①酸效应:在强酸和高温,核酸完全水解为碱基,核糖或脱氧核糖和磷酸。在浓度略稀的的无机酸中,最易水解的化学键被选择性的断裂,一般为连接嘌呤和核糖的糖苷键,从而产生脱嘌呤核酸。②碱效应1.DNA:当PH值超出生理范围(pH7~8)时,对DNA结构将产生更为微妙的影响。碱效应使碱基的互变异构态发生变化。这种变化影响到特定碱基间的氢键作用,结果导致DNA双链的解离,称为DNA的变性2.RNA:PH较高时,同样的变性发生在RNA的螺旋区域中,但通常被RNA的碱性水解所掩盖。这是因为RNA存在的2现有一份均一的核酸样品具有以下性质:(1)能与甲醛反应;(2)变性后,在CsCl中浮力密度增加0.010g/cm3;(3)即使 结果(1)、(4)显示有一些单链DNA。结果(2)显示有一些双链DNA;0.010g/cm3的移动而不是0.014g/cm3,暗示70%DNA是双链的。结果(3)暗示分子是环状的;这点由结果(6)进一步证实生物学离心方法 1.差速沉降离心法:这是最普通的离心法。即采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心,使沉降速度不同的颗粒,在不同的离心速度及不同离心时间下分批分离的方法。此法CsCl等密度梯度离心中,浮力密度高的是在上面还是在下面?RT:在密度梯度介质中进行的依密度而分离的离心法。各组分会依其密度分布在与其自身密度相同的液层中。做密度梯度离心时,不同的DNA分子为什么会漂浮在CsCl浓度梯度中? 高速离心时,CsCl溶液形成密度梯度,靠管口的密度低,靠管底的密度高.DNA分子有大小,分子量大的就在密度高处(此处浮力大,用物理上的重力=浮力来理解),分子量小的在密度低处.不同的分子量的DNA呆在不同段.

#科学#离心分离#诺瓦克#密度梯度离心法#科普

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