细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项 一、细2113胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴5261锅内不断摇动促进其4102融化。移人165315ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。二、细胞传代细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。三、细胞冻存细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内。
集落培养时细胞接种密度该怎么算？ 表述得有点乱…你是说从原细胞悬液中取出一点，稀释成总体积为300微升，含细胞量是2X10^5个，平均分成两份，到两个培养皿中培养么？如果是这样的话，先把母液稀释10000倍，细胞密度就是25.8X10^5.2X10^5/25.8X10^5=0.0775.
冻存的细胞进行代谢吗 冻存的细胞进行代谢细胞进行新陈代谢的主要形式是：有氧呼吸分解有机物，蛋白质的合成，这些活动主要在细胞器以及细胞质基质中完成，而细胞核中只进行DNA的复制，转录，所以细胞核不是活细胞进行新陈代谢的主要场所。培养细胞生长过程：潜伏期→指数增生期→停滞期一、潜伏期(latent phase)：细胞接种后，先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期.此时，细胞质回缩，胞体呈圆球形.然后细胞贴附于载体表面，称贴壁，悬浮期结束.细胞贴壁速度与细胞种类，培养基成分，载体的理化性质等密切相关.一般情况下，原代培养细胞贴壁速度慢，可达10-24 小时或更多，而传代细胞系贴壁速度快，通常10-30 分钟即可贴壁.细胞贴壁后还需经过一个潜伏阶段，才进入生长和增殖期.原代培养细胞潜伏期，约24-96 小时或更长，连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期短，仅需6-24 小时.二、指数增生期(logarithmic growth phase)这是细胞增殖最旺盛的阶段，分裂相细胞增多.指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长是否旺盛的一个重要标志.通常以细胞分裂相指数（Mitotic index，MI）表示，即细胞群中每1000 个细胞中的分裂相数.一般细胞的分裂指数介于0.1%-0.5%，原代细胞分裂指数较低，而连续细胞和肿瘤细胞分裂。
