用丙酮沉淀蛋白时,为什么温度是控制在0-4摄氏度? 防止蛋白降解,或者在0-4度时蛋白在丙酮中溶解度最低
丙酮沉淀蛋白 这个是用来沉2113淀植物组5261织蛋白的,你要沉4102淀细菌的蛋白质要把研1653磨叶片换内成细菌细胞破容壁就好了:三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。药品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
丙酮沉淀法制取细胞蛋白的原理,谢谢 由于甲来醇、乙醇、丙酮等有自机溶剂加入水中2113使容积介电5261常数降低,增加了相反电4102荷的吸1653引力,另一方面因为这些有机溶剂是强亲水试剂,争夺蛋白质分子表面的水化水,破坏蛋白质胶体分子表面的水化层而使分子聚集沉淀。当蛋白沉淀后,立即分离蛋白和丙酮并复溶蛋白完成提取