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羧甲基纤维素酶活性的测定方法 纤维素酶活性

2021-04-09知识1

纤维素酶活性 纤维素酶是水解纤维素生产葡萄糖及纤维二糖的一类酶的总称。包括C1酶、CX酶及纤维二糖酶。C1酶使天然纤维素晶体分链,成为直链纤维素。CX酶不能水解天然纤维素,但能分解直链纤维素β-1,4糖苷键生成纤维二糖。纤维二糖经过纤维二糖酶作用生成葡萄糖。以羧甲基纤维素钠盐(简称CMC)作为纤维素酶作用的底物。但需要指出的是CMC无论在结构上还是在性质上都不同于天然纤维素,天然纤维素不溶于水,而CMC有很强的亲水性,非常容易被纤维素酶分解。在相同条件下,同一种纤维素酶分解CMC所产生的还原糖远大于水解天然纤维素所产生的还原糖。操作方法pH值为4.6的柠檬酸缓冲浓浓度为0.1mol/l的柠檬酸溶液26.7ml和浓度为0.2mol/l的磷酸氢二钠溶液23.3ml,混合后加水稀释到1000ml。pH值为5.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液取浓度为0.2mol/l的磷酸氢二纳溶液25.7ml和浓度为0.1mol/l柠檬酸溶液24.3m1,混合后加水稀释至 1000ml。羧甲基纤维素钠盐溶液称取CMC 1g,加水1000ml,在水浴中加热溶解,再加入20mlpH值为5.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液和 40ml水,混匀。样品酶活的测定取纤维素酶粉5g,充分碾细,加100ml蒸馏水,与40℃水浴中,搅拌3Omin,使酶蛋白充分溶出,过滤,离心取上。

1%羧甲基纤维素钠溶液的配制问题 羧甲基纤维素是水溶性的,所以,50%的乙醇肯定溶解不了啊.或许你可以先用一定比例水溶解了,然后再缓慢滴加入相当比例的乙醇.或者选用高取代度的羧甲基纤维素.

纤维素酶是一种重要的酶产品,它是一种复合酶,主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成,还有很高活力的木聚糖酶活力。纤维素酶在饲料、酒精、纺织和食品等领域具有巨大的市场潜力,将是继糖化酶、淀粉酶和蛋白酶之后的第四大工业酶种,是酶制剂工业中的一个新的增长点。产纤维素酶的微生物有很多,迄今为止国内外共记录了产纤维素酶的菌株大约53个属的几千个菌株,包括细菌、真菌和放线菌。目前,用于纤维素酶生产的主要是真菌类,世界纤维素酶市场中有20%是来自于木霉属和曲霉属,其中木霉属被公认是产纤维素酶最高的菌种之一,是当前生产上应用较多的菌种。自从第二次世界大战中Reese从美军军装上发现了木霉,木霉纤维素酶的工业化生产越来越引起人们的重视,T.ressei成为世界范围内最主要的纤维素酶生产菌株。它的优点在于具有培养粗放、适应性强的特点,适于固体培养和液态深层发酵,它的酶系纤维素酶活性高并且能生产大量的胞外蛋白,它的胞外纤维素系统由60%~80%的外切葡聚糖苷酶,20%~36%的内切葡聚糖苷酶和1%的β-葡聚糖苷酶组成,这些酶协同作用将纤维素转换成葡萄糖。诱变选育是提高菌株酶活的一种有效方法,以T.ressei Rut C-30。

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