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T7RNA聚合酶的活性检测 简述细菌RNA聚合酶的组成、结构和催化特点.

2021-04-09知识5

T7噬菌体在转录的时序调控中不是采用σ因子的级联取代,也不是像T4噬菌体那样对核心酶进行修饰,而是根据自动的感染特点采用了RNA聚合酶的代换来进行时序转录的调控。T7是E.coli的烈性噬菌体,基因组长为39,936nt,顺序已知。整个基因组可能具有55个基因,其中44个基因的产物已鉴别出了,已知30种是有功能的转录可分为3组,30°C整个生活周期约为25¢;分钟,但其DNA的注入很慢,整个的过程约10分钟,而其它的噬菌体仅1分钟即可完成。这也是一种调控的手段,因未注入宿主细胞中的DNA是不能转录的。在感染6分钟后,E.coli的RNA合成体系全部被T4的合成体系所取代。在感染后的前6分钟,T7噬菌体的RNAPol尚未表达,因此仍使用了宿主E.coli的RNA聚合酶,转录的基因主要有10个(0.3,0.4,0.5,0.6,0.65,0.7,1,1.1,1.2,1.3),其0.3基因编码宿主限制酶的抑制蛋白,使T7进入宿主免遭降解;0.7基因编码一种蛋白激酶,能将E.coli的RNA聚合酶磷酸化,为抑制宿主RNAPol作准备;基因1编码T7RNAPol聚合酶,分子量为98KDa,是一条单链肽,它所识别的启动子是由23bp组成的保守顺序(-17~16)。晚期转录分为二组(Ⅱ和Ⅲ)。感染后6~12分钟后T7就利用自己的RNA聚合酶转录第Ⅱ组转录物。

T7是启动子还是RNA聚合酶?有点晕,最好用通俗易懂的话说一下, 我帮你看了一下,T7启动子就是一段DNA序列,这段序列在T7噬菌体中被发现,把这段DNA连到载体质粒上能够增加RNA聚合酶对这段DNA的吸引力,更频繁地使RNA聚合酶转录出mRNA,同时它也受某些因子的调控,限制它来吸引RNA聚合酶就这么简单

什么是工具酶 工具酶是基因重组技术不可缺少的工具。主要有限制性内切酶、连接酶、核酸聚合酶、逆转录酶、核酸酶等。限制性内切酶有ⅰ型和ⅱ型限制性dna内切酶之分,ⅱ型能。

#T7RNA聚合酶的活性检测

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