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提取rna发现最后的沉淀不溶解 RNA的测序原理及方法!^~^

2021-04-09知识1

rna提取怎么室温干燥RNA提取步骤及注意事项(仅供参考):实验步骤如下:1.取50—100mg的组织,加入1ml Trizol试剂,用匀浆器打匀(Trizol先放于冰上)。2.将匀浆室温放置5min。3.加入200μl氯仿,剧烈震荡混匀30s,冰上静置3min。4.12000rpm,4℃离心15min。5.将上清液小心转移到新的1.5ml离心管中(取400μl),加入等量体积的异丙醇,上下颠倒几次混匀,室温下放置15min。(此步中注意:不要吸取任何中间层物质,宁缺勿烂。6.12000rpm,4℃离心15min。7.小心移去上清液,防止RNA沉淀丢失。8.用70%乙醇(DEPC处理的水配制)洗涤1次,加入700μl乙醇,将RNA沉淀弹起,漂洗。(此时RNA是不溶解的)9.8000rpm,室温离心10min。10.尽可能彻底地吸走上清,防止RNA沉淀丢失。11.真空离心干燥3—5分钟,或放在室温下使乙醇完全挥发掉。12.沉淀用30μl DEPC-H2O溶解。如发现沉淀难溶,68℃处理10min。13.RNA检测(1)测定样品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/ml RNA计算RNA的产量。OD260/OD280在1.8-2.0。(2)进行甲醛变性琼脂糖凝胶电泳,确定RNA的完整性和污染情况。注意事项:1.获得RNA效率低有一下原因a:样品裂解或匀浆处理不彻底b:最后得到地RNA沉淀未完全溶解2.A。

RNA提取过程中氯仿萃取之后加无水乙醇析出沉淀太多,漂洗离心时,上述部分沉淀无法溶解,为什么呢? 加完氯仿是用异丙醇析出RNA,我们是用75%的乙醇(用DEPC水来配)洗涤,乙醇是去各种离子的,无水乙醇不能去除离子,洗完之后一定要完全晾干,然后加入适量的DEPC水,在60度。

RNA提取有不溶的白色沉淀 白色的不溶沉淀一定不是RNA或DNA,应该是杂蛋白。影响你定量,计算浓度等。可加蛋白酶降解蛋白

#提取rna发现最后的沉淀不溶解

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