怎样用双缩脲法测定蛋白质？ （一）实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物.在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应.凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应.紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量.测定范围为1-10mg蛋白质.干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等.此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少.主要的缺点是灵敏度差.因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定.（二）试剂与器材1.试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度.如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液.牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制.（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4&8226；5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6&8226；4H2O），用500毫升水。
双缩脲试剂和斐林试剂的作用原理分别是什么？ 双缩脲结构双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成.双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液；双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。具体方法是：先将双缩脲试剂A加入组织样液，摇荡均匀（必须营造碱性环境），在加入双缩脲试剂B，摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质，与蛋白质接触后的颜色呈紫色。
怎样检测黄豆的蛋白质含量？ 蛋白质含量测定方法比较本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法.了解各种测定方法的基本原理和优缺点.蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一.目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）.其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上.定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质.值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果.每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点.在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间.考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用.一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热.含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨.经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液。
