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引物Tm值与PCR产物Tm值有什么区别? 目标产物TM

2021-04-09知识5

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引物Tm值与PCR产物Tm值有什么区别 引物TM是设值和合成引物时的2113Tm值,也就是理论值。而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值引物5261Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时4102候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍微低于Tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当然,做PCR有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法P出基因的话,首先就1653要检查引物设计是否有问题版,如果没有问题,或者以前P出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是Mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.总之,设定退火温度的时候略微比Tm低一点,适当的调权整,多多尝试,就好了.

q-pcr熔解曲线峰的问题 这这块不平很正常啊,这个已经是经过计算画出了的,你可以看看溶解曲线原始的数据图,这是溶解曲线的原始数据,如果你的产物Tm比较适中的话,对数画出来的峰你圈出来的位置就相对比较平,如果Tm较低,就是你出现的那种斜的,这跟你的目标产物的Tm有关,你给的两个图里两种样品的Tm明显不同,第一个图的只有82度左右,第二个图有87度左右呢,你看引物好坏,主要还是看同一个引物的峰有几个,像你第一个图里的引物都还可以啊,只有一个峰

#目标产物TM

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