PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因 PCR看家基因循环数之间的差异

PCR实验方法步骤 一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s→58℃ 30s→72℃ 60s，循环30-35次，最后在72℃ 保温7min。3 结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期。PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因 原因如下：1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行，但新片段的一端是引物开头的，所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度，但。如何确定pcr反应中最佳循环数 是反转录PCR么？如果是real time的话应该可以确定是否到平台期吧？以参考文献来回答也是可以的。关键你要明白对方为什么问这件事。如果没有任何迹象表明你的实验结果不能很好支持你的结论的话，是不应该吸引到杂志的注意力的。由于不知道你的实验具体情况。简单猜测他们问这件事可能是因为25个循环对普通的反转录PCR来说好像属于比较少，我一般看家基因都做30个循环。所以，如果你得出了阴性的结果可能被质疑为假阴性。这个时候最好的办法当然是用阳性对照来证明循环数足够了。在PCR技术中，循环四次后为什么会得到11条目的基因？是不是也算上了第二轮所扩增的目的基因了？ 公式：m=2^n-n-1m为目的基因数，n为循环次数uRealtime PCR如何减小复孔误差值？为什么我前后两次对同一批次的cDNA进行的realtime PCR差异很大？ 误差造成的原因太多了，这种情况最需避免的就是加样的时候造成了加样量之间的误差，建议多做几个重复，将重复中数据明显差距几个以上的循环的数据剔除。加样的时候样品混合好再分装。PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因 原因如下：1、第一2113个循环扩增出来的新片5261段很长4102很长。2、第二个循环以新的长片段为模1653板进行，但新片段的一端是引物开头的，所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度，但只是一条链，所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环，当以第二个循环得到的新片段为模板时，因为这个片段的长度就是需要扩增的长度，当第三个循环完成时，这个片段是需要的长度，且是双链DNA，这就得到了需要的目的基因了。扩展资料：PCR的每个循环过程包括高温变性、低温退火、中温延伸三个不同的事件：1、变性：加热使模板DNA在高温下（94℃左右）双链间的氢键断裂而形成两条单链。2、退火：使溶液温度降至50~60℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合。3、延伸：溶液反应温度升至72℃，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTP），按5'一3’方向复制出互补DNA。参考资料来源：-PCR技术如何确定pcr反应中最佳循环数 我收到杂志的修改说明，让我说一下如何确定的rt-pcr反应循环数，我的是25个循环，我当时只是参考文献没有做梯度pcr确定，现在也不确定25个。pcr技术中，循环n次可以得到等长的目的基因片段多少个？循环n次，需要加入某种引物多少个？ 每经过1个循环，片段数乘2，但是其中有两个包含初始模板，不等长。任意一个单链除了一个初始模板以外都各…PCR一般要经历三十多次循环，为什么？ 大家好，我不是权威，我是漫步科研路。PCR几乎是我们做科研的人天天都要做的事情，跟吃饭睡觉一样频繁。提出这个问题说明你还对PCR不太了解。PCR就是聚合链式反应，而我们进行PCR有很多种用途。根据用途的不一样，循环次数也不一样。当然有一点可以肯定的是循环数越多得到的PCR产物就越多，因为PCR产物的增加是以2的循环数次方增加的。我来举几个例子，比如你如果要去扩增一个基因做基因克隆，这个时候你需要保证的PCR产物的量一定要大，不然后续的克隆成功率低，这样的话对于表达量还好的基因大概就像你说的30几个循环就够了，但是有些基因表达量太低，这样你的起始模板量太低，你就可能需要跑40个循环。而一些基因起始量很高，可能你只需要扩增20几个循环就够了。我们也会做定量PCR，这个是最近新冠病毒的核酸检测办法，直接进行荧光PCR扩增就能搞定。而这里的循环数也是根据情况去看。有可能需要40个循环，也有可能只需要20几个循环就搞定了。所以PCR循环数的选择是根据你起始模板量的多少和你最终需要多少PCR产物量来决定，不是固定的30几个循环。希望我的回答能帮到你，有问题也可以私信我。我们做这个做的太多了。RT-PCR 看家基因（HGAPDH）循环数问题 RT-PCR看家基因（HGAPDH）循环数问题最近一直在做RT-PCR用的看家基因是HGAPDH。但做出来的CYCLENUMBER数值总是出现波动，有时候是14？

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