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RNA提取的时候无水乙醇,75%乙醇,氯仿有哪些作用 氯乙醇液相

2021-04-09知识2

RNA提取的时候无水乙醇,75%乙醇,氯仿有哪些作用 氯仿:RNA脱离DNA及蛋白,从混合液中层析到水相.水相中的RNA可用异丙zhidao醇沉淀浓缩.接着用异丙醇进行二次沉淀,随后用乙醇洗涤沉淀,可去除所有残留的蛋白质和无机专盐.RNA样品属中如果含有无机盐,有可能对后续实验操作中的一些酶促反应产生抑制作用。

CTAB法提取DNA的原理, CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>;0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来.CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,在于液相中;CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离;β-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖.用酚抽提细胞DNA时,有什么作用?使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.使用酚的优点:1.有效变性蛋白质;2抑制了DNase的降解作用.缺点:1.能溶解10-15%的水,从而溶解一部分poly(A)RNA.2.不能。

化学问题氯仿和乙醇分层 氯仿仅微溶于水,酒精是和水互溶的所以加水然后分液即可下层是所需的氯仿,二卤代物密度比水大

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