紫外分光光度法的概念，原理，操作和数据计算方法，以及应用实例 紫外分光光度法应用实例

有关紫外分光光度法？ 在遵循朗伯-比尔定律的基础上，紫外分光光度法可以采用多种研究方法，如双波长、导数、显色及层析-紫外联用等方法，对中药饮片及中成药中的相关成分进行定量分析。在食品。紫外分光光度法 在实际测量中，采用在另2113一等同的吸收5261池中放入溶剂与被分4102析溶液的透射强度进行比1653较，即：A=lg(I溶剂/I溶液)≈lg(I 0/I)吸光度具有加和性：A总λ=A1λ+A2λ+…Anλ比尔定律应用的局限性：只适用于稀溶液、化学偏离、仪器偏离Page 84.2 紫外一可见分光光度计Page 91.光源功能：提供能量激发被测物质分子，使之产生电子光谱谱带（提供宽带辐射）。连续光源：广泛应用在吸收和荧光光谱中(气体放电光源)氘灯、氢灯紫外可见氩灯真空紫外氙灯真空紫外、紫外、可见(热辐射光源)钨丝灯、卤钨灯可见光区Page 102.单色器功能：从光源辐射的复合光中分出单色光。3.吸收池功能：盛放分析试样（一般是液体）Page 114.检测器功能：检测光信号，测量单色光透过溶液后光强度变化的一种装置。5.信号显示系统Page 126.紫外一可见分光光度计的类型(1)单波长单光束分光光度计缺点：测量结果受电源波动的影响较大，误差较大。Page 13(2)单波长双光束分光光度计优点：除了能自动扫描吸收光谱外，还可自动消除电源电压波动的影响，减小放大器增益的漂移。Page 14(3)双波长分光光度计优点：在有背景干扰或共存组分的吸收干扰的情况下，可以对某组分进行定量测定。。紫外分光光度法的概念，原理，操作和数据计算方法，以及应用实例 紫外光波长范围2000埃~400纳米，400纳米以上是可见光了。有的物质可吸收紫外光，利用这个吸收特征来测物质含量，就叫紫外光度法。光源要能发紫外光的，一般用氘灯。光源的波谱范围一般都宽，为防止其它波长的光的干扰，采用分光的方法将光分离（即棱镜原理，一般用滤光片）。将需要的波长透过狭缝，其它光被阻挡，减小干扰。光穿过比色皿时被吸收一部分，另一部分照射到光电传感器件，而转换为电信号而显示给我们。使己知浓度的标准和样品溶液比对。急求紫外分光光度法的详细操作步骤 一、原理可见光、紫外线照射某些物质，主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择性吸收的特性而建立分光光度法或称吸收光谱法的分析方法。它是以朗伯─比耳定律为基础。1朗伯—比耳定律 A=lg—-=ECLT式中 A为吸收度；T为透光率；E为吸收系数，采用的表示方法是（E1％1cm），其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值；C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；L为液层厚度，cm。二、使用范围凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。三、仪器可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。本仪器是根据相对测量的原理工作的，即先选定某一溶剂（或空气、试样）作为标准（空白或称参比）溶液，并认为它的透光率为100％（或吸收度为0），而被测的试样透光率（或吸收度）是相对于标准溶液而言，实际上就是由出射狭缝射出的单色光，。求 怎样用紫外分光光度法测蛋白质含量 1、280nm的光吸收法用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。2、280 nm和260 nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)，但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍；而蛋白质则相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。3、215 nm与225 nm的吸收差法蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收测定时，可用215nm与225 nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。4、肽键测定法蛋白质溶液在238 nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50～500 mg/mL已知浓度的5.0 mL蛋白质溶液，测定238 nm的光吸收值A238，以A238为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。扩展资料：紫外分光光度法原理光谱法（spectrometry）是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或。最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：记忆_染成画紫外分光光度计的使用原理和方法紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visiblespectrophotometry，UV-VIS)1定义：它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析，所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。2分类：按所吸收光的波长区域不同：分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。3、紫外-可见分光光度法的特点：（1)其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快；（与其它光谱分析方法相比）（2）灵敏度高；（3）选择性好；（4）精密度和准确度较高；（5）用途广泛。1.紫外-可见吸收光谱1.物质对光的选择性吸收物质对光的吸收是选择性的，利用被测物质对某波长的光的吸收来了解物质的特性，这就是光谱法的基础。通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸收曲线。在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。2.有机化合物的紫外-可见吸收光谱2.1有机化合物的电子跃迁与紫外-可见吸收光谱有关的电子有三种，即。

#吸收光谱#分光光度法#分光光度计#蛋白质结构#可见光