如何确定pcr扩增产物分子量?其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物,需优化PCR条件。常用于PCR产物的标记,从而在短时间内获得我们所需的大量:-pcr,分子量,扩增。
PCR产物测序要求最低的浓度是多少 pcr产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子。也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带。如果只是进行pcr产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了。问题就在于,如果出现双峰或者多峰,这个样品就白送了,什么也结果也没有。特别你现在用的还是简并引物,本身目标就是为了能扩增出目标片段来,比较建议先做ta克隆,然后测序的时候,最好挑几个克隆去测,不要只送一个克隆。现在测序也不贵,这样一次测上几个克隆,也可以确认在扩增出来的片段中,是否只有一个分子,还是其实有多个不同序列的片段。另外,长度选择的问题,既然设计了简并引物,就是要钓取目前序列还未知的基因,可以选择从长片段开始测序,根据这个结果再考虑短的片段是否需要再继续测序。只有拿到目标序列了,才能决定下一步采用什么方式来获得全长的基因片段。
如何提高pcr目标产物 首先要根据反应体系适当增加循环次数,其次如有必要可以用第一次的反应产物做模板进行第二轮扩增。