原核表达载体和真核表达载体的区别 一、表达载体2113不同：原核表达载体构建重5261组表达载体：41021、载体酶切：将表达质粒用限制性内1653切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体，具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因。二、表达实现方式不同：原核表达载体测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。真核表达载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。三、获得目的基因方式不同：pEGFP-N1载体从结构上看，质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。原核表达载体获得目的基因：1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因。
什么是基因工程抗体 基因工程抗体又称重组抗体， 基因工程抗体又称重组抗体，是指利用重组DNA 及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配，经转染适当的受体细胞所。
关于肿瘤基因治疗中的“旁观者效应”的定义拜托了各位 谢谢 自杀基因治疗：自杀基因治疗的一个显著特点是产生“【旁观者效应】”，【即不仅杀死已经转染的肿瘤细胞，而且可引起临近未转染的肿瘤细胞死亡，其机制是通过细胞间的缝隙连接将毒性代谢产物从转染的肿瘤细胞中转移到相临的肿瘤细胞或者通过血管凋亡抑制肿瘤生长】。研究最多的自杀基因/前药系统是单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷。HSV TK能催化GCV磷酸化，其磷酸化产物能阻止DNA合成，对分离期瘤细胞产生杀伤作用。Hayashi等以逆转录病毒作为载体将HSV TK基因导入Y79RB细胞，体外实验观察到，Y79 TK细胞对GCV的敏感性较亲代提高，同时观察到了旁观者效应的存在；体内实验时，HSV TK/GCV系统基因治疗组裸鼠皮下接种部位无肿瘤生长。Burrows等将HSV TK基因导入人和鼠的神经胶质细胞株，给予GCV后，发现二者均有较强的旁杀伤效应，当培养液中仅5%的肿瘤细胞转染时，却有90%以上的肿瘤细胞死亡。Zager等用HSV TK通过病毒转染治疗肝癌荷瘤小鼠，在大剂量TK治疗下，小鼠肿瘤负荷明显减少。Chevez Barrios等曾报告，选取双眼RB，应用HSV TK/GCV系统基因治疗后，所有患者均获得临床效果，其中一名患者治疗后，监测27个月未查及肿瘤生长，所有患者未出现肿瘤经眼部注射球外蔓延。
