求 怎样用紫外分光光度法测蛋白质含量 谢谢了哈 只要紫外分光光度法测定,不要其他测定方法哈 四种紫外吸收法:1.280nm的光吸收法 用标准曲线法进行测定。。紫外分光光度法 在实际测量中,采用在另2113一等同的吸收5261池中放入溶剂与被分4102析溶液的透射强度进行比1653较,即:A=lg(I溶剂/I溶液)≈lg(I 0/I)吸光度具有加和性:A总λ=A1λ+A2λ+…Anλ比尔定律应用的局限性:只适用于稀溶液、化学偏离、仪器偏离Page 84.2 紫外一可见分光光度计Page 91.光源功能:提供能量激发被测物质分子,使之产生电子光谱谱带(提供宽带辐射)。连续光源:广泛应用在吸收和荧光光谱中(气体放电光源)氘灯、氢灯紫外可见氩灯真空紫外氙灯真空紫外、紫外、可见(热辐射光源)钨丝灯、卤钨灯可见光区Page 102.单色器功能:从光源辐射的复合光中分出单色光。3.吸收池功能:盛放分析试样(一般是液体)Page 114.检测器功能:检测光信号,测量单色光透过溶液后光强度变化的一种装置。5.信号显示系统Page 126.紫外一可见分光光度计的类型(1)单波长单光束分光光度计缺点:测量结果受电源波动的影响较大,误差较大。Page 13(2)单波长双光束分光光度计优点:除了能自动扫描吸收光谱外,还可自动消除电源电压波动的影响,减小放大器增益的漂移。Page 14(3)双波长分光光度计优点:在有背景干扰或共存组分的吸收干扰的情况下,可以对某组分进行定量测定。。最低0.27元开通文库会员,查看完整内容>;原发布者:记忆_染成画紫外分光光度计的使用原理和方法紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visiblespectrophotometry,UV-VIS)1定义:它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用,对物质进行定性分析、定量分析及结构分析,所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。2分类:按所吸收光的波长区域不同:分为紫外分光光度法和可见分光光度法,合称为紫外-可见分光光度法。3、紫外-可见分光光度法的特点:(1)其仪器设备和操作都比较简单,费用少,分析速度快;(与其它光谱分析方法相比)(2)灵敏度高;(3)选择性好;(4)精密度和准确度较高;(5)用途广泛。1.紫外-可见吸收光谱1.物质对光的选择性吸收物质对光的吸收是选择性的,利用被测物质对某波长的光的吸收来了解物质的特性,这就是光谱法的基础。通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度(吸光度),以波长为横坐标,吸光度为纵坐标作图,得出该物质在测定波长范围的吸收曲线。在吸收曲线中,通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。2.有机化合物的紫外-可见吸收光谱2.1有机化合物的电子跃迁与紫外-可见吸收光谱有关的电子有三种,即。求 怎样用紫外分光光度法测蛋白质含量 1、280nm的光吸收法用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。2、280 nm和260 nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收,在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克),但核酸在260 nm处的吸收更强,其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍;而蛋白质则相反,其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。3、215 nm与225 nm的吸收差法蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收测定时,可用215nm与225 nm吸收值之差,通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。4、肽键测定法蛋白质溶液在238 nm处的光吸收的强弱,与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50~500 mg/mL已知浓度的5.0 mL蛋白质溶液,测定238 nm的光吸收值A238,以A238为纵坐标,蛋白质含量为横坐标,绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。扩展资料:紫外分光光度法原理光谱法(spectrometry)是基于物质与电磁辐射作用时,测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法;或。紫外分光光度法与可见分光光度法有何异同 回答:其区别在于波长范围不同。紫外线的波长比可见光的波长小?补充:1.分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量。
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