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qPCR跑50个循环 PCR仪如何设置

2021-04-07知识13

PCR技术具体的过程 PCR技术(聚合酶bai链式反应)du由变性zhi-退火(复性)-延伸dao三个基本反应步骤构成回:①模板答DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至40~60℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板-引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72℃左右,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

PCR实验方法步骤 一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s→58℃ 30s→72℃ 60s,循环30-35次,最后在72℃ 保温7min。3 结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期。

PCR循环次数是否越多越好?为什么 PCR循环次数通常就是30左右.循环数太多了,虽然可以一定程度的提高产物量,但是由于反应时间过长,有一些非特异产物的扩增也会相应增加,而且随着酶的扩增能力下降,合成目标片段的能力也会随之下降,也可能引起其他的非特.

#qPCR跑50个循环

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